甲状腺肿瘤是一种常见的颈部肿瘤,其发病率女性明显高于男性,因而很多学者认为这种差异性很可能与男女体内性激素水平有关。孕激素是一种雌性激素,主要在生殖、发育系统上发挥作用。但是随着孕激素类药物被广泛应用在医疗、畜牧业和农业等上,给社会带来巨大贡献的同时,也给环境带来了严重的激素污染,已经开始影响到生物体自身的内分泌系统。孕激素受体(Progesterone receptor,PR)属于核受体,只有当PR被孕激素激活后才能结合到孕激素受体应答元件的DNA区域,从而启动受体应答元件下游靶基因的表达。本课题利用这种机制并将萤光素酶报告基因克隆到受体应答元件下游,从而建立了一种高灵敏度、高通量的可用于孕激素水平生物检测的稳转细胞株,并将其应用于甲状腺相关肿瘤病人血液中的孕激素类物质水平的检测分析,以期探究孕激素类物质与甲状腺肿瘤发生的关联性。本研究共构建了含有孕激素受体基因的3种不同表达载体和3种含有不同串联倍数的孕激素受体应答元件片段的载体,通过萤光素酶的活性分析,利用质粒共转染技术将活性最高的一对重组质粒pEGFP-N2-hPR/pGL4-PRE4转染到HeLa细胞中,然后经过抗生素筛选和有限稀释法挑选出10个单克隆细胞株。再利用分子克隆技术、亚细胞定位技术鉴定出阳性单克隆细胞株。从第5代到第23代细胞的萤光素酶活性的检测结果表明该细胞株具有较强的遗传稳定性和较高的灵敏度,其检出限可以达到10 pM。因此,该稳转细胞株与萤光素酶活性检测技术结合起来即建立孕激素检测分析系统。同时,还观察到细胞株的萤光素酶活性随着外界环境中孕激素浓度的升高而增强,但是浓度高于106 pM孕激素反而会降低萤光素酶活性甚至是引起细胞死亡,这也可以说明环境中孕激素长期污染能给动物和人类健康造成危害,人类应该更加高度重视环境激素污染问题。为了研究孕激素水平和女性甲状腺肿瘤高发率之间的关联性,本研究利用孕激素受体的稳转细胞株检测分析系统对甲状腺相关肿瘤疾病的女性患者血清中孕激素水平进行检测分析。经过生物统计学分析发现,甲状腺癌病人的血清中孕激素水平低于与正常人血清中孕激素水平,并且有26.7%甲状腺肿瘤病人血清种孕激素平均水平低于1 nM,而正常组血清孕激素平均水平都高于1 nM;正常组中有22.7%样品的孕激素水平超过50 nM,而甲状腺肿瘤组中却没有。通过差异性分析显示甲状腺肿瘤组和正常组的孕激素水平存在显著性差异。尽管女性体内孕激素水平的波动较大,但本研究发现甲状腺肿瘤患者血液中的孕激素水平明显低于正常人血液中孕激素水平,提示在一定范围内甲状腺肿瘤患者肿瘤的发生与体内孕激素水平呈现负相关,故深入研究女性血液中孕激素水平可能对于甲状腺肿瘤早期诊断具有一定的参考价值。