近年来,癌症发病率逐年增高,治疗方法的研究日益被世界所重视。本实验的目的是从家蝇幼虫体内分离纯化出具有抗肿瘤活性的凝集素,考察其对乳腺癌细胞的抑制作用,研究对肿瘤细胞作用机理。为家蝇体内活性物质的开发应用提供有力的科学依据,也为新型药物的研制提供新的物质。凝集素是一类非免疫原的糖蛋白,具有凝集细胞和沉淀多糖的能力。凝集素,普遍存在于许多物种和高等生物的组织中,其中部分凝集素还具有抗肿瘤活性。利用亲和层析方法,从家蝇幼虫体内分离出一种凝集素,其分子量为38kDa。经MTT检测,90μg/mL的凝集素可明显抑制肿瘤细胞增殖,而对正常细胞则无明显的抑制作用。AO/EB和Hochest/PI染色后,经共聚焦显微镜观察,能观察到典型的凋亡形态,即染色质浓缩,表明凝集素与细胞凋亡有关。该凝集素诱导MCF-7细胞中活性氧(ROS)发生积累,导致线粒体通透性转换孔(PTP)开放,线粒体膜电位(△ψm)随着时间的延长逐渐降低,线粒体中的细胞色素C从线粒体通透性转换孔中释放到胞浆中。此外,钙离子(Ca2+)的变化可调节凝集素诱导的MCF-7细胞凋亡,并受活性氧积累的调控。免疫印迹实验结果表明,JNK蛋白的表达量在MCF-7细胞中发生上调,且JNK依赖于活性氧的调控；流式细胞仪数据显示,加入JNK的抑制剂SP600125后,凋亡率由15.5%下降到7.45%,表明这种抑制剂能抑制MCF-7细胞的增殖,因此,JNK参与了凝集素诱导细胞的凋亡过程。随后凝集素使Bax和Bcl-2的表达发生变化,Bax与Bcl-2蛋白的表达比例升高,细胞色素C释放,Caspase被激活,cleaved-caspase-9和cleaved-caspase-6表达量升高,LaminA裂解。综上所述,凝集素诱导MCF-7细胞凋亡是通过ROS-JNK介导的Caspase和ROS-PTP途径。