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背景与目的:子宫内膜异位症（endometriosis,EMs）是育龄妇女常见病,近年来发病率有明显上升趋势,临床表现为盆腔疼痛且相当数量患者合并不育,严重影响中青年妇女健康和生活质量。EMs病变广泛、形态多样、极具侵袭和复发性,是妇科难治病,其发病机制复杂,学说众多,目前普遍认为遗传和环境因素均能影响EMs发病。研究发现,EMs与卵巢癌发病密切相关,可能是肿瘤的癌前病变。最近越来越多的研究证实该假说且发现EMs患者异位病灶组织中包含较多的基因体细胞突变,其中包括KRAS、TP53、PTEN、BRCA2和ERBB3等肿瘤相关基因,提示基因突变在EMs发病中可能扮演重要作用。另一方面,也有较多的研究表明炎症与EMs发病密切相关:EMs患者异位病灶及血清中炎性因子浓度明显升高,且这些炎性因子水平升高与患者体内孕酮水平降低有关。人半胱天冬酶募集结构域家族成员14（caspase recruitment domain family member 14,CARD14）基因（NM001257970）是胞内核因子kappa B（nuclear factor kappa B,NF-κB）信号通路上游成员,通过解除下游抑制物IKK alpha（IKKα）的解离,促进转录因子65（p65）的磷酸化而转运入核,进而激活NF-κB信号通路,在炎症发生发展过程中起着重要作用。考虑到EMs含较多体细胞突变且炎性因子在其中扮演重要作用,我们拟检测EMs患者异位病灶中是否存在CARD14基因突变,进而可能激活炎症相关信号,促进EMs发病。方法:收集我院经病理检验确诊的卵巢子宫内膜异位症患者101例,每位患者收取其异位内膜病变组织和外周血。分别提取组织及血液总DNA,经PCR扩增、测序后进行序列比对,找出CARD14基因的潜在体细胞突变。1)由Origene公司获得pCMV6-hCARD14-DDK野生型质粒,随后定点诱变构建pCMV6-hCARD14-DDK突变型质粒,然后包装成病毒;2)将病毒感染至HEC-1B细胞,分为3组:（1）空载体对照（control,C）,（2）CARD14野生型（wild type,WT）,（3）突变型（mutant type,MT）,Western blotting（WB）验证CARD14蛋白在细胞中表达水平;3)进行细胞生物学功能检测:CCK-8法检测细胞增殖率;Transwell检测细胞侵袭率;流式细胞术检测细胞的凋亡率和细胞周期;细胞划痕实验检测细胞迁移能力;平板克隆实验检测细胞成瘤能力;4)应用串联质量标签（tandem mass tag,TMT）技术检测CARD14野生型、突变型及空载对照的蛋白组学变化,分析CARD14突变可能影响的下游基因及信号通路。结果:1、101例卵巢子宫内膜异位病变标本中存在2例CARD14 p.V239A（c.716T>C）体细胞突变（2.0%）,引起第239位缬氨酸突变为丙氨酸（V239A）,蛋白质结构模拟结果提示该突变可能会引起CARD14蛋白结构改变。随后,将CARD14突变与患者临床数据进行相关性分析,未发现与突变显著相关的临床指标。2、细胞学功能检测中,平板克隆实验检测到CARD14的突变型（p.V239A）能够增强HEC-1B细胞的成瘤能力（P<0.01）,细胞划痕实验表明突变能够增强细胞的迁移能力（P<0.01）;而细胞增殖、侵袭、凋亡及周期等无统计学显著差异（P>0.05）。3、TMT技术检测结果表明:与野生型相比,CARD14突变过表达的HEC-1B细胞的上调差异表达蛋白质有177个,下调差异表达蛋白质155个。经过GO功能和KEGG通路分析后表明:CARD14野生型与突变型过表达HEC-1B细胞之间存在38个免疫相关蛋白表达存在差异,提示CARD14可能通过这些基因/信号通路促进EMs发病。结论:1、本研究中首次在卵巢子宫内膜异位症中发现CARD14 p.V239A（c.716T>C）体细胞突变（2.0%）,且该突变能够导致蛋白质结构改变。2、CARD14 p.V239A突变能够增强HEC-1B细胞的成瘤及迁移能力,但是对细胞增殖、侵袭、凋亡及周期等无明显影响,提示CARD14可能通过影响细胞的成瘤及迁移能力而促进卵巢子宫内膜异位症的发生。3、TMT蛋白质组学检测结果表明CARD14野生型与突变型过表达HEC-1B细胞之间存在38个免疫相关蛋白有表达差异,通过GO功能和KEGG信号分析表明CARD14可能通过参与免疫及炎症相关的信号通路参与EMs发病。