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杂交育种可以将不同亲本的基因进行重新组合产生具有新基因型的后代,这些杂交子代自身的遗传信息可以有广泛的变异,因此它是产生杂种优势的基础,也是进一步进行遗传育种的良好素材,杂交个体中都会表现出明显的杂交优势。本研究采用雌性河川沙塘鳢与雄性鸭绿沙塘鳢进行种间杂交,获得具有双亲优势性状的杂交后代,对其形态特征、常规的核型进行分析,以及在分子水平(SSR、EST-SSR)对杂交后代的遗传背景进行深入研究,寻找出优良性状的特异性遗传标记;获得生长速度快、肉质鲜美、抗病性强、经济价值高的新品系,为塘鳢鱼类育种提供一定的理论依据和参考资料。具体研究结果如下:1.河川沙塘鳢与鸭绿沙塘鳢杂交育种育苗采用人工授精的方法,以河川沙塘鳢为母本、鸭绿沙塘鳢为父本进行远缘杂交,主要步骤包括:挑选性腺成熟的雌鱼、雄鱼,采用干法授精,将附着有受精卵的网盘置于适宜水温、溶氧的水缸中孵化,受精卵经336h左右孵化,仔鱼脱膜孵出,获得正常发育的杂交子代。2.河川沙塘鳢EST-SSR标记开发及多态性检测提取健康河川沙塘鳢的卵巢、血液、肝脏RNA并混合在一起逆转录构建cDNA文库,上机测序获得大量的EST序列。通过微卫星序列筛选软件(MISA)的筛选得到221个便于设计引物的位点。对挑选出的这些SSR序列进行引物设计,获得具有单一条带的SSR位点100个,利用8%聚丙烯酰胺凝胶进行多态性的筛选,最终获得具有高多态性微卫星位点42个。3.河川沙塘鳢(♀)×鸭绿沙塘鳢(♂)双亲及其杂交子代的核型分析采用常规核型分析,利用胸腔活体注射植物血细胞凝集素(PHA)和秋水仙素溶液后,取头肾细胞,低渗处理,空气干燥法制片,结果表明.:河川沙塘鳢的核型为2n=44,2st+42t,NF=44;鸭绿沙塘鳢的核型为2n=44,2st+42t,NF=44;杂交子代的核型为2n=44,4st+40t,NF=44。通过对比分析,杂交子代不但继承父本的一套染色体,也继承了母本的一套染色体,可见杂交子代为真正的杂交种。4.河川沙塘鳢(♀)×鸭绿沙塘鳢(♂)杂交子代及其双亲的微卫星分析运用传统的磁珠富集法获得来自河川沙塘鳢基因组的15对微卫星引物对河川沙塘鳢(♀)、鸭绿沙塘鳢(♂)及河川沙塘鳢(♀)×鸭绿沙塘鳢(♂)杂交子代3个群体进行扩增,研究3个群体的分子遗传机制,结果表明:15对微卫星引物中OP215a和OP110a在鸭绿沙塘鳢中呈现单态性,其余的13对引物在3个群体中均能良好扩增;其中OP10a、OP23a和OP46a3对引物可用于鉴别河川沙塘鳢、鸭绿沙塘鳢及杂交子代。这3个群体的平均多态信息(PIC)含量分别为0.645、0.537、0.513;平均有效等位基因数(Ne)分别为4.297、3.618、2.779;平均观测杂合度(HO)分别为0.633、0.592、0.629。杂交子代遗传分化较明显,子代继承了双亲的等位基因,符合孟德尔遗传定律,因此推断河川沙塘鳢与鸭绿沙塘鳢的杂交子代确实为杂交沙塘鳢;杂交子代与河川沙塘鳢和鸭绿沙塘鳢的遗传距离分别为1.003、0.836,表明杂交子代接受父本的遗传信息更多,通过系统进化树也证明了这点。用来自河川沙塘鳢转录组的42个EST-SSR位点对河川沙塘鳢、鸭绿沙塘鳢及其杂交子代三个群体进行遗传多样性的对比分析,其中在河川沙塘鳢中有8个位点偏离Hardy-Weinberg equilibrium(Bonferroni校正)。根据EST-SSR核心序列的碱基重复数发现,碱基重复次数与该位点的多态信息含量不成正比。通过对双亲及杂交子代的分析,发现5个位点(E-7、E-219、E-75、E-85、E-200)的组合可以鉴别亲本和杂交子代。河川沙塘鳢、杂交子代和鸭绿沙塘鳢的平均等位基因数分别为4.125、2.650、3.500;平均观测杂合度分别为0.524、0.476、0.440;平均多态信息含量分别为0.458、0.349、0.357。通过对杂交子代体重、体长及体高的测量,运用15个G-SSR位点,使用统计软件对同一标记不同基因型杂交子代个体间的表型进行多重比较发现,位点OP215a与体高显著相关;OP83a、OP13a、OP48a与体重、体长、体高极其显著相关;OP155a与体重、体长显著相关,与体高极其显著相关。5.河川沙塘鳢(♀)×鸭绿沙塘鳢(♂)杂交子代及其亲本的5S rDNA结构组成分析通过河川沙塘鳢、鸭绿沙塘鳢的5SrDNA序列与杂交子代对比发现,子代的5S rDNA这段序列与双亲的类似,杂交子代都继承了双亲部分的遗传信息,但是杂交子代的序列结构偏向于父本鸭绿沙塘鳢,这与微卫星分析结果一致。6.河川沙塘鳢(♀)×鸭绿沙塘鳢(♂)杂交子代及其亲本营养成分比较通过对河川沙塘鳢(♀)×鸭绿沙塘鳢(♂)杂交子代的肌肉营养成分进行测定、并与双亲进行比较分析,结果表明:杂交子代肌肉的氨基酸以及必需氨基酸总量介于双亲之间,鲜味氨基酸总量低于双亲。根据FAO/WHO标准和鸡蛋蛋白质标准,由于杂交子代肌肉的EAA/TAA,以及EAA/NEAA比值和胱氨酸含量作为优质的蛋白源均高于双亲。因此,从营养成分来看,杂交子代具有潜在的培育价值。