DSA对NK细胞对内皮细胞损伤机制及haplo-HSCT中的小样本临床观察研究

来源 :山西医科大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:xiao959907530
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目的:  单倍体相合造血干细胞移植(haploidentical hematopoietic stem cell transplant ation, haplo-HSCT)是根治血液系统恶性疾病的重要手段之一,其为需要接受异基因造血干细胞移植(Allogeneic hematopoietic stem cell transplantaion, allo-HSCT)的患者解决了供者匮乏的问题。但是移植排斥、移植物抗宿主病(Graft-versus-host disea se, GVHD)、植入失败(graft failure , GF)、植入功能不良均为haplo-HSCT的严重的相关不良反应。抗供者特异性HLA抗体(donor specific human leukocyte antigen antibody, DSA)是同种异体免疫反应中产生的抗体,在实体器官移植中DSA与肾移植过程中超急性、急性和慢性排斥反应密切相关[1]。在allo-HSCT中DSA是移植失败的危险因素[2]。国内相关研究发现DSA与非血缘供者造血干细胞移植预后密切相关[3]。血管内皮细胞是移植后造血干细胞与受者最早接触的细胞场所,内皮细胞功能状态是决定移植成败的关键所在。  本实验拟在体外通过建立DSA介导自然杀伤细胞(Natural killer cells, NK)的抗体依赖细胞介导的细胞毒效应(Antibody dependent cell-mediated cytotoxicity, ADCC)对人脐静脉内皮细胞(Human umbilical vein endothelial cells, HUVEC)损伤的实验,间接反映DSA与GVHD的关系;并且通过回顾分析接受allo-HSCT的急性髓细胞白血病患者及供者一般资料,结合KIR/ HLA配型结果,探讨DSA对a llo-HSCT预后的影响,为在临床找寻最佳移植供者以及预防allo-HSCT术后GVHD和改善allo-HSCT患者预后提供参考。  方法 :  (1)体外实验:DSA介导NK细胞对内皮细胞损伤机制  抽取2015年1月-2017年10月于山西医科大学附属肿瘤医院确诊为AML拟行allo-HSCT的10名健康供者外周血,分选、培养NK细胞作为效应细胞,将结合DSA的HUVEC(CDH)作为靶细胞,未结合DSA的HUVEC(UDH)作为阴性对照,通过MTT法检测HUVEC在490nm处的OD值和利用流式细胞仪检测IFN-γ表达量,反应ADCC效应对HUVEC的损伤作用。  (2)DSA对allo-HSCT治疗急性髓细胞白血病预后的影响  回顾分析10例之前接受allo-HSCT的患者资料,结合患者HLA配型、KIR检测、DSA检测结果,通过对比,分析DSA阳性组患者及DSA阴性组患者在移植后造血重建、GVHD发生率等方面的差异。  结果:  (1)随着效靶比增加,HUVEC细胞活性降低,IFN-γ表达量增高,同一效靶比(1:1、10:1、20:1)下,CDH组HUVEC细胞活性明显低于UDH组,IFN-γ表达量明显高于UDH组,在效靶比为1:1时,随着DSA浓度增加,CDH组HUVEC细胞OD值渐降低,IFN-γ表达量增加,差异具有统计学意义(P<0.05)。  (2)所有患者输注供者MNC中位数为7.4(7-12)×108/kg,CD34+细胞中位数为3.4(4-7)×106/kg,移植后所有患者均获得造血重建,预存DSA阳性组患者ANC≥0.5×109/L中位时间为15(10-22)d,PLT≥20×l09/L的中位时间为18(9-22) d,预存DSA阴性组患者ANC≥0.5×109/L中位时间为12(9-14)d,PLT≥20×l09/L的中位时间为16(8-21)d,差异具有统计学意义(P<0.05)。预存DSA阳性组较阴性组造血重建时间延迟、GVHD 累计发生率高(83.3%VS 35.8%),差异具有统计学意义,(P<0.05)。  结论:  1.NK细胞对HUVEC的杀伤活性与DSA的浓度呈正相关。  2.在小样本临床观察中,相比DSA阴性组,DSA阳性组haplo-HSCT后造血重建延迟和GVHD累计发生率高,所有患者均获得造血重建(可能的原因是我们对于DSA强阳性患者,移植前经利妥昔单抗治疗可降低DSA的MFI值)。
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