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目前,我国口腔颌面部的癌瘤中以鳞状细胞癌(简称鳞癌)最为多见,约占80%以上,男性多于女性。而舌鳞癌是其中最常见者,尤其在舌前2/3部位。舌癌多发生于舌缘,其次为舌尖、舌背及舌根等处,常为溃疡型或浸润型。一般恶性程度较高,生长快,浸润性较强,常波及舌肌,致使舌运动受限,使说话、进食及吞咽均发生困难。由于舌体具有丰富的淋巴管和血液循环,并且舌的机械运动频繁,因此舌癌淋巴转移较早且转移几率较高。舌癌还可发生远处转移,一般多转移至肺部,严重危害患者的生命及生活质量。目前对于舌鳞癌的治疗是以手术为主的综合治疗,虽然这些年取得了较大的进展,但是其临床治疗中仍有许多疑点,转移复发率依然较高,病人的身心承受着莫大的痛苦。因此,寻找新的低毒高效的抗肿瘤药物,仍是医务工作者为之奋斗的目标。植物激素是植物体内合成的对植物生长发育有显著作用的几类微量有机物质,也被称为植物天然激素或植物内源激素。它们都是些简单的小分子有机化合物,但其生理效应却非常复杂、多样。植物激素对植物的生长发育有重要的调节控制作用。现在,已有越来越多的报道称将植物激素应用于肿瘤领域的研究并取得了显著的成绩。吲哚乙酸(Indole-3-acetic Acid,IAA)是一种植物生长激素,在植物细胞分裂、生长、分化过程中起到了关键的作用。辣根过氧化物酶(Horseradish Peroxidase,HRP)是一种含有激素的植物过氧化物酶,它可氧化包括吲哚乙酸在内的一系列底物。目前的一些研究表明,IAA在人体内有很高的耐受性,不易被哺乳类过氧化物酶氧化,只有在辣根过氧化物酶存在时才会使IAA氧化而产生有毒的代谢产物,对肿瘤单独发生毒性作用,不会损害正常组织。国外学者在研究IAA/HRP的共同作用时,IAA的作用浓度取值不同,但HRP的浓度一定,提示IAA作用可能存在一定的浓度效应。而当IAA和HRP以二者联合作用时的相同浓度单独作用时,则不会产生任何毒性效应。为了探讨IAA和HRP对舌鳞癌细胞株Tca-8113的作用,我们将IAA和HRP联合作用于Tca-8113细胞,观察Tca-8113细胞在用药前后的改变情况,希望能够了解该植物激素对舌鳞癌的作用及其机制,为治疗舌鳞癌的临床应用提供理论依据,同时针对IAA/HRP抗肿瘤的特点,加强其联合用药的研究,充分发挥其独特效用,为临床治疗肿瘤提供新的思路。目的:观察IAA/HRP作用于体外培养的Tca-8113细胞后,对其细胞增殖、细胞周期及凋亡的影响,及其与时间、浓度、剂量的相关性,为其治疗舌鳞癌提供实验依据和理论基础。材料与方法:1、Tca-8113细胞株由上海第二医科大学口腔医学院提供。2、IAA和HRP购自郑州创生生物工程有限公司。3、倒置显微镜观察IAA/HRP作用于细胞后细胞的生长状态及形态学改变。4、采用MTT检测各组细胞的增殖抑制率。实验分组:设对照组和实验组,对照组只加细胞,实验组按照IAA的浓度分别为20、40、60、80、100μmol/l五组,每组HRP的浓度均为1.2mg/l。测其作用于Tca-8113细胞24h、48h、72h、96h后的OD值,并计算各组细胞的增殖抑制率。5、采用流式细胞仪检测蛋白周期的改变。6、采用免疫细胞化学方法检测IAA/HRP对Tca-8113细胞Bcl-2蛋白表达的改变。结果:1.IAA/HRP对Tca-8113细胞增殖的影响与对照组相比,除20μmol/l组无统计学意义(P=0.158＞0.05)外,40μmol/l浓度以上的IAA与HRP结合均可抑制Tca-8113细胞的增殖,随着浓度的增加,细胞增殖能力下降;且随着时间的增加,其增殖能力也下降,其差别均有统计学意义(P＜0.05),说明IAA/HRP对Tca-8113的抑制作用具有时间和浓度依赖性。2.细胞周期分析Tca-8113细胞在IAA/HRP作用48h时,随着IAA药物浓度的增大,流式细胞仪检测示G1期细胞百分比呈上升趋势,G2期和S期细胞百分比均呈下降趋势,其差别均具有统计学意义(P＜0.05)。3.免疫细胞化学结果分析免疫细胞化学检测结果显示:除对照组与浓度为20μmol/l(P=0.930＞0.05)和40μmol/l(P=0.073＞0.05)之间无统计学意义外,对照组和浓度为60μmol/l、80μmol/l、100μmol/l组的测量值均存在显著差异(P＜0.001),而且随着IAA浓度的增加,Bcl-2的值下降明显,说明IAA对Tca-8113细胞的抑制具有浓度依赖性。从24小时到72小时其值呈下降趋势,且存在显著差异(P＜0.001),说明IAA/HRP对Tca-8113细胞的抑制具有时间依赖性。结论:1.IAA/HRP能抑制Tca-8113细胞的增殖,其增殖抑制作用与时间和浓度呈正相关。2.流式细胞仪结果显示G1期细胞的百分比随着浓度的增加而逐渐增加,S期和G2期的比值降低,且均具有统计学意义。因此,由IAA/HRP引起的细胞周期阻滞是Tca-8113细胞生长抑制的另一个重要的原因。3.IAA/HRP能够抑制Bcl-2的表达,从而促进Tea-8113细胞的凋亡。4.本试验结果表明60μmol/l以上的药物组在各处理时间点上对Tca-8113均具有抑制作用。