【摘 要】
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目的:通过观察化痰清热活血方(以下简称W)及其三个拆方化痰方(以下简称Ht)、清热方(以下简称Q)、活血方(以下简称Hx)对人肺腺癌细胞GLC-82增殖的抑制和血小板衍生生长因子α(
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目的:通过观察化痰清热活血方(以下简称W)及其三个拆方化痰方(以下简称Ht)、清热方(以下简称Q)、活血方(以下简称Hx)对人肺腺癌细胞GLC-82增殖的抑制和血小板衍生生长因子α(platelet derived growth factor receptorα,PDGFRα)-磷脂酶Cγ1(phospholipase,PLC-γ1)-蛋白激酶Cα(protein kinaseC,PKCα)信号转导通路的影响,研究化痰、清热、活血三法治疗肺癌的机理,探讨痰浊、瘀血、热毒与肺癌病变和PDGFRα-PLC-γ1-PKCα信号转导的关系。 方法:采用人肺腺癌细胞GLC-82为实验对象,倒置显微镜下观察细胞的生长情况,计算出药物对细胞作用的抑制率,筛选出有效的药物;用正交实验设计选出疗效最好的方剂;用化痰清热活血方及其拆方处理细胞,均与空白组对照,显微镜下观察细胞GLC-82生长状态及形态改变,用Westernblot检测各治法组对细胞GLC-82中PDGFRα-PLC-γ1-PKCα信号转导通路中各蛋白表达的影响。 结果:1.化痰清热活血方及其三个拆方对细胞GLC-82的增殖明显抑制,各治法组对细胞形态的作用明显不同:化痰组细胞可见细胞表面粗糙,细胞变圆、缩小,停止生长,有少量细胞碎片;活血组可见细胞形态皱缩,变圆,透光度减低,形态不规则,贴壁性变差,细胞碎片增多;清热组细胞可见细胞变成圆球形,细胞间隙变大,胞质粗糙,可见有较多的细胞碎片;全方组细胞表面粗糙,多数细胞呈空泡样结构,有大量的细胞碎片。2.化痰清热活血方及其拆方均能抑制细胞GLC-82的生长,全方组抑制作用最强,抑制率随药物浓度、时间的增加而增高,对细胞生长的抑制呈现剂量-效应和时间-效应依赖关系。3.人肺腺癌细胞GLC-82可检测到PDGFRα、PLC-γ1、PKCα蛋白分子的超量表达。4用IC50药物浓度作用细胞时,化痰清热活血方及其拆方均能调节PDGFRα、PLC-γ1、PKCα信号通路各个蛋白表达水平。 结论:1.化痰清热活血方及其三个拆方对人肺腺癌细胞GLC-82的生长均有抑制作用,全方组效果最好,化痰、清热、活血三法具有协同效应。2.化痰清热活血方及其拆方均能降低GLC-82细胞PDGFRα-PLC-γ1-PKCα信号通路各蛋白表达的水平,化痰清热活血方及其拆方抑制肺腺癌细胞的增殖与抑制PDGFRα-PLC-γ1-PKCα信号转导相关。3.肺腺癌的发病和PDGFRα-PLC-γ1-PKCα转导通路信号增强关系密切。4通过药效反证,证实在肺腺癌病变中,痰浊、热毒、瘀血与PDGFRα-PLC-γ1-PKCα信号表达和转导增强关系密切。
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