灵芝菌种的选育及液体发酵饮料的研究

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灵芝(Ganoderma Lucidum)为担子菌纲多孔菌科灵芝属真菌,它在防病治病,延年益寿等方面的作用得到中外学者的公认。现代医学研究表明,灵芝的功效成分灵芝多糖具有很高的营养价值和保健价值<[2]>。 本论文以灵芝多糖的产量为目标,采用灵芝深层发酵工艺,制备灵芝发酵液,经过合理调配,应用正交试验设计,结合感官分析,研制出一种既保持灵芝原有营养价值和保健功能,又具有独特风味和口感的复合型饮料。为人们提供了一种集营养与良好口感于一身的饮料,有着广阔的前景。 本论文运用分子生物学的方法对四株生产用菌进行鉴定,四株菌均属于灵芝属,说明分子生物学方法是鉴定灵芝的快速、有效的方法,可用于微生物的系统发育研究,可以鉴定到属,而菌株间的差异不能显示出来。 本文的主要内容包括以灵芝多糖及感官评定为指标,确定了最佳培养条件和营养条件,即以玉米2%、蛋白胨0.2%、KH<,2>PO<,4> 0.3%、KCl 0.05%、MgSO<,4> 7H<,2>O 0.15%为摇瓶发酵液体培养基;最适培养条件为:温度25℃、初始pHS.5、摇床转速150rpm、种龄144h、装液量150m1/250ml。在此条件下摇瓶发酵培养6天,菌丝体产量达3.26mg/ml(干重),多糖含量达3.21%。 本文通过对灵芝多糖含量的测定及感官评定,选育出发酵液澄清、口味略苦、多糖含量高的薄树芝LWG4作为液体深层扩大培养的菌株。 本文以灵芝深层发酵培养的新鲜菌丝体为原料,分别对热水浸提和超声波破碎两种方法进行研究,确定最佳提取条件:沸水浸提2~3小时;超声波破碎40分钟。此时多糖释放完全,且多糖结构破坏不大。 本文使用DEAE-52纤维素阴离子交换柱分离纯化灵芝菌丝体多糖,得到中性多糖A、酸性多糖B、酸性多糖C、酸性多糖D、酸性多糖E五种多糖。经过紫外.可见扫描仪在200~400mm扫描,260nm、280nm处无吸收峰,说明是纯多糖;以葡萄糖为标准糖进行薄层层析,发现酸性多糖E是同多糖,即葡聚糖。 本文将选育出的优秀菌株LWG4上发酵罐做深层发酵扩大培养,观察其发酵液及菌丝球形态,并测定多糖含量,结果为在发酵的第6天,菌体的生物量的累积达到高峰,获得的菌体干重达2.511mg/ml,多糖含量为1.762%,虽然菌丝体干重和多糖含量都没有摇瓶培养时高,工艺参数有待于进一步改进,但是为灵芝深层发酵的扩大培养提供了数据,有一定的经济价值。 本文也做了灵芝饮料的感官评定:通过查阅文献,设计了以蔗糖、柠檬酸、香精种类、香精量为4因素的10个正交实验(L<,9>);请10位不同年龄不同职业的消费者进行感官评定,根据评定结果,确定了在本实验中香精的种类为最主要影响因素,其次是蔗糖的加入量,香精的加入量影响最小。即:香精种类选择>蔗糖加入量>柠檬酸加入量>香精加入量;合理的调配比例为蔗糖加入量9%,柠檬酸加入量0.3%,使用芒果香精,香精的加入量为0.1%。
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