Prohibitin2促进前列腺癌细胞迁移机制的探究

来源 :南开大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:sunjuanhuahard
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目的:PHB2是蛋白抑制素家族(Prohibitin)中的一员,在很多肿瘤中高表达。PHB2是一种多功能的蛋白,既参与雌激素受体相关基因的转录又在线粒体中发挥着重要作用。前期实验证明,PHB2在很多癌症组织中高表达,且与肿瘤的转移和侵袭有关。因此本实验预探究PHB2参与前列腺癌肿瘤转移和侵袭的机制以及其在此过程中所扮演的角色,为进一步解释前列腺癌侵袭和迁移机制提供一定的实验依据。  方法:(1)体外培养不同类型的前列腺上皮细胞系,通过实时定量RT-PCR技术检测不同恶性程度的前列腺上皮细胞系中PHB2的差表达。(2) PHB2促进前列腺癌细胞迁移:克隆PHB2的表达质粒,并合成PHB2的siRNA,前列腺癌细胞系PC3和DU145分别转染该表达质粒和PHB2的siRNA,通过划痕实验分别检测过表达和敲除PHB2对细胞迁移的影响。(3) PHB2调节Akt2的表达:用Western Blot的方法检测过表达和抑制PHB2后,Akt2的蛋白表达变化情况,并加入放线菌酮检测PHB2对Akt2蛋白稳定性的影响。(4)通过实时定量RT-PCR技术检测过表达或干扰PHB2表达后,检测PHB2是否通过表观遗传学修饰调控肿瘤相关基因的表达变化。  结果:PHB2与前列腺癌恶性进展呈正相关,前列腺癌细胞系PC3和DU145中PHB2的表达量明显高于正常前列腺上皮细胞系。与对照相比,稳定转染PHB2表达质粒的前列腺癌细胞系PC3和DU145的迁移能力明显增加,Akt2的蛋白表达量降低;抑制PHB2的表达后,前列腺癌细胞系PC3和DU145的迁移能力减弱,Akt2的蛋白表达量增加,即PHB2负调节Akt2的蛋白表达,而对其mRNA水平的调节不明显。并且干扰PHB2的表达后能增加Akt2的蛋白稳定性。另外,PHB2可抑制肿瘤抑制基因TFPI2和p21的表达。  结论:PHB2在前列腺癌恶性进程中发挥着重要作用。PHB2可能通过调节Akt2的蛋白稳定性、增加其表达量,促进前列腺癌细胞系PC3和DU145的迁移。与此同时,PHB2可抑制肿瘤抑制因子TFPI2和p21的表达,参与前列腺癌的恶性进展。
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