【摘 要】
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表面形貌结构作为材料表面的物理特征之一,具有模拟细胞外基质的仿生特性以及对细胞行为有重要的诱导作用,已被广泛用于细胞行为的研究以实现更优的组织再生。目前研究大多基于二维表面形貌结构对细胞行为的研究,而忽略了天然细胞外基质是一个具有三维拓扑结构的载体。虽然有个别研究进行了相应表面形貌支架对组织再生的尝试,为骨组织工程支架采用相关技术方案协同多种细胞进行骨再生提供了一定的借鉴。但由于技术的限制,如何在
【基金项目】
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国家自然科学基金(51572110,31470934); 广东省科技计划项目(2015A020212025)
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表面形貌结构作为材料表面的物理特征之一,具有模拟细胞外基质的仿生特性以及对细胞行为有重要的诱导作用,已被广泛用于细胞行为的研究以实现更优的组织再生。目前研究大多基于二维表面形貌结构对细胞行为的研究,而忽略了天然细胞外基质是一个具有三维拓扑结构的载体。虽然有个别研究进行了相应表面形貌支架对组织再生的尝试,为骨组织工程支架采用相关技术方案协同多种细胞进行骨再生提供了一定的借鉴。但由于技术的限制,如何在支架内部实现可控的表面微观形貌仍然存在较大的挑战。本论文在3D打印和软光刻技术相结合的基础上,采用软光刻技术在3D打印的二维支架上制备表面拓扑形貌可控的片层支架,再通过堆叠片层支架获得内部可控表面形貌支架。为获得对骨髓间充质干细胞(BMSCs)成骨分化和巨噬细胞(RAW264.7)免疫调节的骨修复支架,本文在二维平面上制备凹槽微图案尺寸大小分别为25.19±0.40μm、34.81±0.63μm、45.04±0.65μm;光栅微图案尺寸大小分别为21.60±0.56μm、30.76±0.72μm、39.47±0.90μm,并系统研究凹槽和光栅微图案对BMSCs成骨分化和RAW264.7细胞免疫表型的调节作用。研究结果显示,大小为25微米左右的凹槽微图案和40微米左右的光栅微图案对巨噬细胞免疫调节具有较好的M2趋向性,主要表现为在M2刺激RAW264.7细胞中上调RAW264.7细胞M2标记基因(Arginase、IL-10)的表达,在M1刺激RAW264.7细胞中下调M1标记基因(TNF-α、i NOS)的表达;同时,对骨髓间充质干细胞的成骨分化相关基因(ALP、COLI和RUNX2)的表达、钙结节形成以及碱性磷酸酶活性具有较好的促进作用。其中,25微米左右的凹槽微图案对巨噬细胞和骨髓间充质干细胞的调节效果最好。此外,利用BMSCs和M2极化RAW264.7细胞构建直接/间接培养体系,研究表明在直接/间接共培养中25微米左右的凹槽微图案对BMSCs的成骨分化仍具有显著地促进作用。最后,大鼠颅骨缺损修复动物实验表明基于25微米左右的凹槽微图案构建可控内部表面微形貌支架显示的骨修复性能要优于表面无图案支架。本研究利用3D打印和软光刻技术相结合,通过堆叠片层成功制备具有表面可控形貌支架,并证实了微图案在二维平面上能够调节BMSCs成骨分化和RAW264.7细胞免疫表型,且微图案转移至三维支架上仍可以促进支架骨修复能力。这些研究有望为基于内部表面拓扑结构的三维支架设计在骨组织再生中的潜在应用做出贡献。
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