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实验背景:黑色素瘤作为目前发展最快、预后最为不良的恶性肿瘤之一,现已引起越来越广泛的关注。侵袭和转移是黑色素瘤最显著的特征及影响患者生存的首要因素,也是其治疗困难的一个重要原因。肿瘤的局部扩散和转移是很多癌症致死的主要原因,肿瘤的浸润和转移是一个多步骤、多因素综合作用的复杂过程,涉及到多种黏附分子、基质蛋白酶、细胞因子及相应的信号转导机制和相关的基因改变,其转移机制的研究是目前的难点和热点。最近的研究表明,分泌性白细胞蛋白酶抑制剂(secretory leukocyte protease inhibitor,SLPI)既是炎症抑制剂也是蛋白酶抑制剂,通过降解周边组织参与肿瘤的发生与代谢。研究表明SLPI的表达水平与肿瘤迁移入侵能力呈正相关,迄今为止,SLPI如何增强肿瘤迁移的恶性表型暂不清楚。本课题以黑色素瘤A375细胞作为研究对象,通过RT-PCR、Western Blot、明胶酶谱实验及Transwell细胞迁移实验验证SLPI促进A375细胞迁移的分子机制。实验结果:1.RT-PCR结果显示在A375 SLPI(+)细胞中MMP-2 m RNA水平没有明显变化,但是MMP-9 m RNA水平随之增加,用5μmol/L的U0126处理A375 SLPI(+)细胞9h后,SLPI及MMP-2的转录水平不受影响,但是MMP-9 m RNA水平较未处理的A375 SLPI(+)细胞明显降低;2.Western Blot实验结果显示,A375 SLPI(+)细胞中MMP-2/MMP-9的表达量随之增加,同时细胞外信号调节激酶ERK1/2磷酸化增加,在A375 SLPI(+)细胞的基础上对SLPI表达进行干扰则细胞中MMP-2/9表达量相应减少,且ERK1/2磷酸化降低,用5μmol/L的U0126处理A375 SLPI(+)细胞9h后,与A375 SLPI(+)细胞相比,MMP-2/9的表达量减少,且ERK1/2磷酸化水平的降低十分明显;3.明胶酶谱实验结果显示,与正常A375细胞及在A375 SLPI(+)基础上加入SLPI si RNA的细胞相比,A375 SLPI(+)细胞中MMP-9的活性更强,用5μmol/L的U0126处理A375 SLPI(+)细胞9h后,MMP-9的活性明显降低,但是各实验组分泌型MMP-2活性没有明显变化;4.Transwell细胞迁移及侵袭实验结果显示,与其他实验组细胞相比较,A375SLPI(+)细胞迁移及侵袭速度更快,穿过Transwell小室膜的细胞数量明显增加,结果具有统计学意义;用5μmol/L的U0126处理A375 SLPI(+)细胞9h后,与A375 SLPI(+)细胞相比,穿膜细胞数量明显减少,与空白对照组未做任何处理的A375细胞的穿膜数量接近。通过上述所有结果表明,在黑色素瘤A375细胞中,SLPI作为促进细胞迁移及侵袭的关键信号分子,通过激活MEK信号通路,增加ERK1/2磷酸化,从而诱导下游MMP-2/9表达,促进黑色素瘤细胞A375细胞的迁移及侵袭。