论文部分内容阅读
目的:观察海水进入兔眼玻璃体后早期视网膜功能和形态学变化,探讨海水对视网膜功能的影响和可能的作用机制,为海水对视网膜损伤的临床伤情评估和救治预案提供参考建议。方法:健康无眼疾新西兰白兔48只,体重2.5～3.0kg。随机选择其中40只建立动物模型:于兔右眼颞上方平行于角膜缘5mm处用穿刺刀作一长约3mm巩膜穿通伤,剪除流出的玻璃体,向玻璃体中央部注入1ml实验用人工海水,6-0尼龙线缝合巩膜伤口。同样方法向左眼玻璃体内注入1ml平衡盐溶液(balanced saltsolution,BSS)作为自身对照。按伤后30min、2h、6h、12h、24h随机分成5组,每组8只,术后各时间点经暗适应F-ERG检查后摘除眼球行光镜、电镜检查观察视网膜组织形态学变化;TUNEL法检测视网膜细胞凋亡情况,免疫组织化学法测定Bcl-2、Bax蛋白在各组视网膜组织中的表达水平。另外8只兔不作任何处理,为正常组。F-ERG检测数据、细胞原位凋亡和Bcl-2、Bax蛋白表达水平数据结果进行统计学处理和对比分析。结果:(1)BSS对照组和正常组F-ERG b波振幅值无显著性差异,海水组伤后b波振幅随时间延长逐渐下降,自伤后6h开始与BSS对照组相比较有显著性差异(P＜0.05),且海水组伤后2h、6h和12h之间比较差别有统计学意义(P＜0.05),伤后12h和24h相比较无显著性差异。(2)视网膜组织形态学变化:BSS对照组在各时间点与正常组相比未见明显病理改变。光镜下海水组伤后6h见视网膜光感受器细胞、内核层细胞、神经节细胞胞浆肿胀,明显空泡变性。12h见视网膜光感受器细胞的锥杆层结构改变较明显,外核层细胞排列不规则,内核层明显空泡变性,细胞数目明显减少,神经节细胞核数目明显减少。透射电镜下,海水2h组神经节细胞和双极细胞大部分核膜凹陷,视锥、视杆细胞外节膜盘排列紊乱,伤后6h见光感受器外节膜盘线粒体肿胀呈球形,嵴断裂,12h即见内核层细胞核染色质固缩明显,部分核碎裂。神经节细胞核膜凹陷,染色质浓集。(3)细胞凋亡及免疫组织化学观察:正常组及BSS对照组视网膜组织中仅见个别TUNEL阳性细胞,海水组在伤后30min组视网膜组织中仅发现少量TUNEL染色阳性细胞;6h组在视网膜内核层和神经节细胞层棕黄色着色的细胞明显增加,与对照组相比有显著性差异(P＜0.05),并随着时间的延长阳性细胞数量增加,伤后12h总的凋亡细胞数目基本达到高峰值。海水组伤后30min和2hBcl-2蛋白表达暂时性升高,6h及以后时间其表达下降,且低于对照组,与同时间点对照组相比有显著性差异(P＜0.05)。在海水组Bax蛋白表达随时间的延长呈逐渐升高趋势,6h及以后各时间点与对照组相比较有显著性差异(P＜0.05)。对照组各时间点Bax蛋白表达未见明显变化,和正常组比较无显著性差异。海水组Bcl-2/Bax的比率随时间的延长逐渐下降。结论:(1)海水进入兔眼玻璃体6h后引起视网膜功能损伤,随时间延长,视网膜功能损伤加重。(2)海水进入兔眼玻璃体后光镜下观察视网膜组织在2h即出现形态学改变,6h细胞形态改变明显,12-24h即出现不可逆改变,内核层及神经节细胞层细胞数目减少。透射电镜观察,海水2h组神经节细胞和双极细胞大部分核膜凹陷,视锥、视杆细胞外节膜盘排列紊乱。6h组视杆细胞外节膜盘出现弯曲、分离、碎解及空泡变,内节线粒体肿胀呈球形变,。12h出现视网膜细胞核染色质浓集、核固缩。(3)海水进入玻璃体后对视网膜组织造成损伤,视网膜组织细胞存在异常凋亡,Bcl-2和Bax在细胞凋亡机制中起重要作用,Bcl-2/Bax比率与视网膜细胞数的减少有关。