背景：死亡时间(postmortem interval, PMI)推断一直是法医工作的研究重点和热点,腐败尸体的PMI推断更是法医学实践中的难题。微生物在尸体腐败过程中的作用越来越引起法医学者的重视。尸体腐解的原因是昆虫和微生物共同作用的结果。尤其在机体死亡至昆虫接触尸体之前的时间间隔里,尸体的腐败分解更是由微生物主导完成的。微生物中能产生腐败代谢产物的细菌通常称为特定腐败微生物(specific spoilage organisms, SSOs)。已有研究表明腐败过程也是SSOs相互作用和演替的过程,为研究尸体上SSOs的演替规律进行PMI推断的法医学研究提供了理论和实践基础。目的：在隔离昆虫和未隔离昆虫两种不同的环境下,调查大鼠尸体上SSOs的演替规律,对比大鼠尸体上口腔、眼周、阴道不同部位SSOs种类差异,分析不同PMI的SSOs种类及数量变化规律,寻找具有PMI推断价值的优势SSOs,探索利用SSOs演替规律进行PMI推断的程序和方法。并对人尸体SSOs演替规律进行PMI推断的初步探索。方法：运用Miseq高通量测序技术,研究PMI=0h,24h,216h时的大鼠尸体口腔SSOs,初步筛选可规律性演替的菌群。基于该筛选结果,通过细菌常规生化鉴定法及16S rDNA分子鉴定法双向验证,对比研究大鼠尸体不同部位相关时间点SSOs种类变化规律；应用细菌分析仪进行菌种半定量计数,进一步验证不同PMI有规律演替的菌群。并收集调查明确PMI的成人尸体上菌种的分布情况,探索利用SSOs演替规律对人尸体PMI推断的新途径。结果：Miseq高通量测序结果在生物分类学种水平上共获得81个种的SSOs,其中链球菌和巴斯德菌在口腔SSOs结构中占主要地位,分别在每个组中占25%以上的序列数。尸体腐化24h后,大部分SSOs呈现递减和消失趋势,而八叠球菌属及葡萄球菌属呈递增的趋势并成为优势菌,SSOs多样性显著降低。通过常规生化鉴定法对SSOs菌种初步定性与定量并通过16S rDNA分子鉴定双向验证,获取了隔离昆虫和未隔离昆虫两种不同的环境下,大鼠尸体口腔、眼周和阴道三个不同部位,PMI=0h,24h,216h各个确定时间点上SSOs的详细演替资料,共发现7个科(真菌,放线菌,假单胞菌,杆菌,肠杆菌,放线菌,葡萄球菌),并细分为38个种。成人尸体上共发现了8个科30个种的SSOs,种类和数量均要低于健康成人,成人和大鼠尸体之间的SSOs分布规律有着很多的相似性。结论：本研究发现通过Miseq高通量测序,对比分析PMI=0h的样本M1,PMI=24h的样本M2以及PMI=216h的样本M3发现,大鼠尸体在24h内口腔SSOs多样性显著降低,少数优势菌群如肺炎链球菌(Streptococcus_sp.)和侵肺巴斯德菌(Pasteurella_pneumotropica)等凸显。而在尸体晚期PMIM3阶段出现的优势菌属为八叠球菌属(Sporosarcina)及葡萄球菌属(Staphylococcus)。在尸体各部位SSOs演替过程中猪链球菌(Streptococcus suis I)、解乳糖奈瑟菌(Neisseria lactamica)及粪肠球菌(Enterococcus faecalis)演替规律凸显。大肠杆菌(Escherichia coli)和奇异变形杆菌(proteus mirabilis)在尸体腐解过程中表现出明显的演替规律性和特异性,并初步建立了昆虫活动与细菌行为在PMI推断上的交汇点。人和大鼠的尸体之间的细菌演替规律有着很多的相似性,进一步证实在一定自然环境条件了所得结论具有一定的普适性。图22幅,表2个,参考文献26篇