【摘 要】
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基于抗原-抗体反应的各种检测技术的发展,为分子生物学、生物化学、免疫学、微生物学、免疫病理学及对临床疾病的诊断治疗及预防作出了重大贡献.传统的抗原、抗体的制备方法
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基于抗原-抗体反应的各种检测技术的发展,为分子生物学、生物化学、免疫学、微生物学、免疫病理学及对临床疾病的诊断治疗及预防作出了重大贡献.传统的抗原、抗体的制备方法虽然能解决某些问题,但过程复杂,效率较低,因此如何利用现有的世界先进技术,解决抗原、抗体生产的通用性问题,为研制体外诊断试剂建立技术平台具有十分重要的实用意义.基于以上目的,该文进行了以下研究:从人心肌组织中提取总RNA,经逆转录合成cDNA第一链,用Touchdown PCR模式合成cDNA第二链并扩增目的基因,通过重新设计上游引物,利用PCR程序,完成了第二个密码子(Ala)GCG→GCC第四个密码子(Gly)GGG→GGT的突变,最后克隆入pMDT-18载体.用PCR及XhoⅠ加SpeⅠ双酶切作鉴定,均能出现630bp的目的条带,测序结果与预期序列一致.该研究构建的载体拷贝数高,容易分离,带有Amp抗性基因,Ⅲ基因部分序列,含有LacZ强启动子,Pelb引导序列,XhoⅠ、SpeⅠ等克隆位点等,同时,该载体还具有多种功能:既是噬菌体展示载体,也是分泌型表达载体,同时还是一种高效率的T载体.合成两段编码cTnⅠ<,95~108>抗原表位DLCRQLHARVDKVD的互补寡聚核苷酸单链T1和T2,通过退火使其变成双链,与BamHⅠ加EcoRⅠ双酶切的PC89连接,转化XL1-Blue后提取质粒,设计下游引物用PCR方法鉴定,扩增出450bp阳性条带,测序结果与预期序列一致.
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