盐地碱蓬SsNHX1基因及拟南芥AtNHX1、AtNHX5基因的功能分析

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  本实验利用植物表达载体pROKⅡ和农杆菌GV3101将SsNHX1(全长1665bp)、SsNHX2(N端缺失形式,缺失SsNHX1N端49个氨基酸,长1530bp)、AtNHX1(全长1614bp)及AtNHX5(全长1554bp)基因在拟南芥中过量表达。在含40mg/L卡那霉素的培养基上筛选获得SsNHX1和SsNHX2的纯合转化子,并对其进行了分子鉴定和耐盐性分析。因时间和工作量关系,只筛选到AtNHX1、AtNHX5的T1代转化子。SsNHX1和SsNHX2的纯合转化子的分子鉴定及耐盐性分析结果如下:1.Southern杂交结果显示,野生型植株(对照)没有明显的杂交信号,转基因株系有强阳性信号。表明SsNHX1、SsNHX2的确已经整合到拟南芥的基因组中,但不同株系插入拷贝数不等。2.Northern杂交结果显示转基因植株均有杂交信号,表明插入拟南芥中的SsNHX1、SsNHX2已经正常转录,但野生型拟南芥也有杂交信号,可能是内源的AtNHX与SsNHX同源性很高,探针与AtNHX结合的结果。不同转基因株系杂交信号强弱不同,表明不同株系表达量不同。3.200mMNaCl处理下转基因株系生长情况好于野生型对照。但转SsNHX1和SsNHX2的株系长势没有显著差异。4.测量不同浓度NaCl(0,100,200mM)处理后野生型和转基因植株的干重、鲜重,结果表明胁迫下不同转基因植株的干重、鲜重均高于对照,但转SsNHX1和SsNHX2的株系干鲜重没有显著差异。5.测量不同浓度NaCl(0,100,200mM)处理后野生型和转基因植株的Na+、K+含量,结果表明胁迫下不同转基因植株的Na+、K+含量均高于对照,但转SsNHX1和SsNHX2的株系Na+、K+含量没有显著差异。
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