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作为预防和治疗血栓栓塞性疾病的主要药物，微生物来源的溶栓剂展现出广阔的前景。本项目组研究发现，以蔗糖和豆饼为培养基主要基质时，蛹虫草(Cordyceps militaris)深层培养可以产生至少两种纤溶酶。本文对其深层培养产生的纤溶酶的分离纯化的方法及抗凝、溶栓性质进行了研究，并通过建立具有血栓倾向的高血脂动物模型，检测该酶对其纤溶能力的影响，为开发高效、安全、经济的新型溶栓药物提供理论依据。采用20%硫酸铵盐析，Sephadex G-25凝胶过滤色谱，Phenyl-Sepharose HP疏水相互作用色谱，CM-Sepharose FF弱阳离子交换色谱和Superdex75凝胶过滤色谱对纤溶酶进行分离，提纯后的两种纤溶酶经SDS-PAGE电泳鉴定均达到电泳纯。纤溶酶I比活力达到1467.44U/mg，总纯化倍数为36.07，活力回收率为5.79%。纤溶酶II比活力达到1681.58U/mg，总纯化倍数为41.33，活力回收率为4.00%。通过Q-TOF2串联质谱氨基酸序列测得纤溶酶的八个肽段的序列，分别为：I-E-D-F-P-Y-Q-V-D-L-R；A-N-C-G-G-T-V-I-S-E-K；Y-V-L-T-A-G-H-C-A-E-G-Y-T-G-L-N-I-R；T-N-Y-A-S-V-T-P-I-T-A-D-M-I-C-A-G-F-P-E-G-K；K-D-S-C-S-G-D-S-G-G-P-L-V-T-G-G-K；D-S-C-S-G-D-S-G-G-P-L-V-T-G-G-K；V-V-G-I-V-S-F-G-T-G-C-A-R；A-N-K-P-G-V-Y-S-S-V-A-S-A-E-I-R，鉴定发现与蛹虫草纤溶酶CM01的部分序列同源性为100%。蛹虫草纤溶酶在凝血过程的任何阶段均可以不同程度的抑制血栓凝块的形成；体外溶栓作用显著，可在4h内使血液凝块基本溶解；其不具有类凝血酶活性，作用于人血纤维蛋白(原)各亚基次序分别为α的降解速率大于β和γ亚基；对人免疫球蛋白和人血清白蛋白有部分水解作用，说明该酶实际用药过程中会存在一定的副作用，但影响不大。同时也可以使人凝血酶发生部分降解，由此推测，该酶在血栓预防性治疗中，也可以起到一定的效果。蛹虫草纤溶酶对小鼠一般行为及协调性运动均无影响，且无过敏现象，健康状况良好。蛹虫草纤溶酶可以有效降低具有血栓倾向的高血脂症动物的总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)和低密度脂蛋白(LDL-C)水平，同时升高高密度脂蛋白(HDL-C)水平。在TC和TG水平上高、低剂量组均为极显著(p<0.01)；在HDL-C水平上高剂量组出现显著性差异(p<0.05)；在LDL-C水平上高、低剂量组显著差异分别为极显著(p<0.01)和显著(p<0.05)。蛹虫草纤溶酶低、高剂量组相对高血脂模型组可以升高心脏指数、脾脏指数和肾脏指数，降低肝脏指数，其对心脏、脾脏、肾脏和肝脏具有一定的保护作用。