背景糖尿病是由多病因引起的,以高血糖为代谢特点的慢性内分泌疾病,病理变化表现为隐匿时程长,并发症多,累及器官广泛,临床表现复杂。随着我国国民经济的发展,生活方式的改变,原有生活体系的重建,糖尿病的发病率呈逐年上升趋势。肿瘤坏死因子α(Tumor Necrosis Factor-α,TNF-α)是一种重要的炎症介质,它在糖尿病发病中具有一定的作用。黄芪(Astragalus)为豆科植物,富含皂苷、生物碱、多糖、氨基酸及硒、锌、铜等多种微量元素,其主要活性成分黄芪多糖(Astragalus Polysaccharides,APS)具有显著的扩血管、降血糖、降血脂和改善微循环的功效,能够减轻或延缓糖尿病肾病进展。目的本文通过观察黄芪多糖对于机体脂肪细胞中TNF-α表达的影响,进一步阐明黄芪多糖对于代谢性疾病糖尿病是否具有一定的疗效。本文以前体脂肪细胞诱导的脂肪细胞作为研究对象,采用MTT法、ELISA法及RT-PCR等研究方法来检测黄芪多糖对于脂肪细胞中TNF-α表达的影响,为糖尿病防治诊断以及临床试验提供实验数据。方法1.分别取小鼠脂肪组织和3T3-L1细胞株,诱导分离培养脂肪细胞,进行油红O染色鉴定。2.按培养液中黄芪多糖浓度不同分组,以0μg/m L组为对照组,10μg/m L组,100μg/m L组,500μg/m L组和1000μg/m L组为实验组,每组设3个复孔,选取12 h,24 h,48 h为测定时间点,分别检测细胞的吸光度值,MTT法筛选体外培养脂肪细胞的培养基中所含的最适作用黄芪多糖浓度。3.黄芪多糖对脂肪细胞TNF-α表达的影响:以APS浓度100μg/m L组为实验组,以0μg/m L组为对照组,选取0 d,1 d,2 d至8 d作为测定的时间点,细胞ELISA法检测2组脂肪细胞合成和分泌TNF-α蛋白的情况;使用RT-PCR法检测2组脂肪细胞中TNF-α的mRNA的表达情况。结果1.经MTT法检测发现,在100μg/m L浓度黄芪多糖组,脂肪细胞的生长抑制程度明显高于其他组(P<0.05),即确定本研究中100μg/m L为黄芪多糖诱导的最适浓度。2.经ELISA检测,实验组脂肪细胞合成和分泌TNF-α蛋白的情况在0 d,1 d,2d时与对照组相比无明显差异,在实验3 d后开始低于对照组(P<0.05)3.经RT-PCR检测,实验组脂肪细胞的TNF-αmRNA水平在0 d,1 d,2 d时与对照组相比无明显差异,3 d后与对照组相比开始呈现下调(P<0.05)。结论本研究中黄芪多糖干预脂肪细胞的最适药敏浓度为100μg/m L;黄芪多糖可抑制脂肪细胞TNF-α表达。