新型鸭呼肠孤病毒(Novel Duck Reovirus,NDRV)属于呼肠孤病毒科,正呼肠孤病毒属。201 1年分离鉴定出NDRV-TH11毒株之后,发现与以往报道的禽呼肠孤病毒相比,NDRV-THl 1宿主谱更广,致病性更强,给养鸭业造成了严重的经济损失。NDRV σC蛋白为结构蛋白,具有吸附功能,可以通过对宿主细胞的识别作用启动病毒感染过程。宿主蛋白 TRAM1(Translocation-associated membrane protein 1)是一种参与I型膜蛋白质分解的蛋白质,通过升高含量来缓解内质网(ER)在应激时的压力。病毒完成自身复制必须依赖于宿主系统,而宿主在面对病毒入侵时所产生的拮抗和防御机制都依赖于病毒和宿主蛋白的相互作用。本文筛选出可能与病毒σC蛋白具有相互作用的宿主因子,并研究两者互作对病毒复制的影响,为了解NDRV的致病机制提供理论依据,为该病的防治提供一定参考依据。主要内容如下:(1)使用CO-IP技术结合质谱分析,银染实验筛选出所有可能与NDRV-TH11 σC蛋白具有相互作用的宿主因子,并对其进行了生物信息学分析。结果筛选出100个可能与σC互作的宿主蛋白因子,宿主因子与蛋白质的代谢过程密切相关,并且参与了蛋白的翻译和复制过程。(2)我们对TRAM1基因进行进一步研究,利用鸭胚原代成纤维细胞(Duck embryo f1broblast cells,DEFs)扩增TRAM1基因,并对其进行测序然后将结果呈交到GenkBanK上。随后对TRAM1基因进行生物信息学分析以及建立针对TRAM1基因的荧光定量检测方法。结果显示鸭源TRAM1基因与鸟源TRAM1基因相似,并与哺乳动物也较接近,同时也成功建立了一种检测鸭源TRAM1的荧光定量方法。(3)随后利用免疫共沉淀(CO-IP)、GST PULL-DOWN、激光共聚焦实验鉴定σC和TRAM1是否具有互作关系,结果显示σC和TRAM1有互作关系,并且有共定位现象,共定位在细胞质中。(4)为了进一步研究σC与TRAM1互作对病毒复制有何影响,我们将TRAM 1过表达和采用siRNA技术抑制TRAM1表达后接种病谒,利川荧光定垃和噬斑实验对其影响进行探讨。研究结果表明:采用siRNA将TRAM1抑制后,促进了病毒的复制,相反,过表达TRAM1,抑制了病毒的复制。这一结果提示σC与TRAM1互作会抑制病毒的复制。