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第一部分 骨髓间充质干细胞减少柯萨奇病毒B3诱导的原代心肌细胞凋亡 目的： 探讨骨髓间充质干细胞（Bone marrow Mesenchymal stem cells，BMSCs）是否能减少柯萨奇病毒B3（coxsackievirus B3，CVB3）引起的心肌细胞凋亡。 方法： 体外分离和培养SD大鼠骨髓间充质干细胞，流氏细胞仪技术检测BMSCs表面抗原CD45、CD90的表达。检测BMSCs能否被CVB3感染，CVB3感染BMSCs后分别于4h、12h、24h、48h、72h观察细胞生长状态，qRT-PCR检测各时间点BMSCs中CVB3mRNA的表达量。体外培养SD大鼠乳鼠的原代心肌细胞，随机分为正常对照组、感染组和共培养组，感染组和共培养组心肌细胞感染CVB3，共培养组心肌细胞感染CVB3后，采用Transwell共培养法与BMSCs共培养。分别于感染病毒24h和48h后观察各组心肌细胞形态学改变，酶联免疫吸附（ELISA）方法检测细胞上清中IL-10的浓度，Western blot检测心肌细胞Bcl-2、Bax、cleaved-caspase3蛋白的表达。 结果： 1）BMSCs细胞呈长梭形、纺锤形，BMSCs表达CD90细胞表面抗原、不表达CD45细胞表面抗原。CVB3感染对BMSCs生长无明显影响，BMSCs仅有少量CVB3mRNA表达，且CVB3mRNA表达量随时间延长而下降，感染48h后CVB3mRNA表达显著下降（P＜0.05）。2）与正常对照组相比，感染组和共培养组心肌细胞CVB3感染24h后，细胞形态无明显变化，但收缩频率降低；感染病毒48h后，感染组心肌细胞皱缩变圆，折光度增强，坏死脱落细胞增加，与感染组相比，共培养组坏死脱落细胞明显减少，还可见少量心肌细胞收缩。3）感染病毒24h后，共培养组细胞上清IL-10的浓度均高于正常对照组和感染组（P＜0.05），正常对照组和感染组间差异无统计学意义；共培养48h后，共培养组细胞上清IL-10的浓度仍高于正常对照组和感染组（P＜0.05），正常对照组和感染组间差异无统计学意义；各组内不同时间段相比较，正常对照组和感染组IL-10浓度随时间延长而升高（P＜0.05），而共培养组则降低（P＜0.05）。4）感染病毒24h后，与正常对照组相比，感染组和共培养组Bcl-2蛋白表达均降低（P＜0.05），Bax、cleaved-caspase3蛋白表达均升高（P＜0.05），Bcl-2/Bax比值均降低（P＜0.05），感染组与共培养组相比蛋白表达差异无统计学意义；共培养48h时，与正常对照组相比，感染组Bcl-2蛋白表达低于正常对照组（P＜0.05），Bax、cleaved-caspase3蛋白表达高于正常对照组（P＜0.05），Bcl-2/Bax比值低于正常对照组（P＜0.05），与感染组相比，共培养组Bcl-2蛋白表达升高（P＜0.05），Bcl-2/Bax比值升高（P＜0.05），cleaved-caspase3蛋白表达降低（P＜0.05），共培养组与正常对照组相比蛋白表达差异无统计学意义。 结论： 骨髓间充质干细胞可抵抗CVB3的感染及复制，能减少CVB3诱导的原代心肌细胞凋亡。 第二部分骨髓间充质干细胞改善病毒性心肌炎心肌纤维化 目的： 探讨骨髓间充质干细胞对病毒性肌炎心肌纤维化的作用及其最佳干预时间。 方法： 48只4周龄BALB/C雄性小鼠随机分为3组：正常对照组（8只）、心肌炎组（8只）、心肌炎不同阶段（1d、3d、1w、2w）骨髓间充质干细胞（BMSCs）干预组（32只），腹腔注射柯萨奇病毒B3建立病毒性心肌炎小鼠模型，干预组于注射病毒后的1d、3d、1w、2w不同时间段分组尾静脉注射小鼠BMSCs，心肌炎组和正常对照组尾静脉注射磷酸盐缓冲液，注射病毒4周后行心脏超声检查，处死小鼠并取材，光镜观察并计算心肌组织病理积分及胶原容积分数，qRT-PCR法检测心肌组织匀浆胶原纤维I(col1α1)和胶原纤维III(col3α1)mRNA表达， Western blot检测心肌组织匀浆Smad2、p-Smad2、TGF-β1蛋白表达。 结果： 1）与正常对照组相比，心肌炎组小鼠左室前后壁变薄（P＜0.05），左室收缩期末期内径和容积增大（P＜0.05），左室射血分数（LVEF）及短轴缩短率（FS）明显降低（P＜0.05），干预组各亚组LVEF及FS较心肌炎组均有改善（P＜0.05），其中心肌炎1w和2w时MSCs干预组改善最明显（P＜0.01）。2）光镜下心肌炎组心肌组织病理积分及胶原容积分数较正常对照组增高（P＜0.05），干预组胶原容积分数较心肌炎组降低（P＜0.05），其中心肌炎1w和2wMSCs干预组胶原容积分数较心肌炎1d和3dMSCs干预组低（P＜0.05）。3）与正常对照组相比，心肌炎组col1α1和col3α1 mRNA及TGF-β1蛋白表达均升高（P＜0.05），干预组col1α1和col3α1 mRNA及TGF-β1蛋白表达较心肌炎组降低（ P＜0.05），其中TGF-β1蛋白表达在心肌炎1w MSCs治疗干预组下降最显著（P＜0.01）。 结论： 在CVB3诱导的病毒性心肌炎模型中，尾静脉注射骨髓间充质干细胞可减少CVB3感染所导致的心脏纤维化程度，改善心功能，且最佳干预时间为病毒感染后1周至2周内。