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犬尿石症是临床上常见的泌尿系统疾病。其发病与性别、年龄、品种、饮食等因素有关。近年来,犬草酸钙尿结石的发病率在不断上升,且有超过磷酸铵镁尿结石的趋势。因此研究犬草酸钙尿结石的形成机理和防治有重要的临床意义。本研究对南京地区多家代表性动物医院2018年10月至2019年12月期间47个犬尿石症病例进行流行病学调查分析,并对收集到的尿结石样本进行化学成分分析,初步评估了南京地区在一年多时间里犬尿结石的发生情况;通过建立小鼠草酸钙尿结石模型和同步给小鼠灌胃复方防石添加剂的饲养试验,评估了复方防石添加剂对小鼠肾机能生化指标、尿液pH和肾脏抗氧化指标以及对肾脏组织病理学变化和钙盐沉积的影响;利用体外培养犬肾小管上皮细胞（MDCK细胞）,研究硒蛋氨酸在草酸钙诱导的MDCK细胞氧化损伤中的作用,通过检测细胞活性、细胞内活性氧水平及骨桥蛋白（OPN）mRNA和蛋白的表达水平,评估硒对MDCK细胞的保护作用并探索其机制,为临床防控犬草酸钙尿结石的研究奠定一定的理论基础。试验一、南京地区犬尿石症的发病情况调查本试验收集了南京地区2018年10月至2019年12月多家具有代表性的动物医院的犬尿石症病例47例,通过流行病学调查并利用结石分析试剂盒对尿结石化学成分进行分析。结果发现,本次调查研究中,各种类型结石所占比例为:磷酸铵镁结石占46.81%（22/47）,草酸钙结石占38.30%（18/47）,尿酸盐结石占8.51%（4/47）,胱氨酸结石占4.26%（2/47）,其他结石占2.13%（1/47）。犬的年龄、性别、品种及饮食结构均对尿结石的发生部位和类型有一定程度的影响。本次调查结果可为南京地区犬尿石症的防治和研究方向提供基础资料。试验二、复方防石添加剂对模型小鼠草酸钙尿结石的防控效果初探本试验采用1%乙二醇自由饮水和2%氯化铵每日灌胃的方式建立小鼠草酸钙结石动物模型。在构建模型的同时,同步给小鼠灌胃低、中和高剂量的复方防石添加剂进行为期28天的干预试验。期间定期记录小鼠体重变化,观察精神状态及死亡情况;检测各组小鼠血清钙、镁、磷、肌酐、尿素氮及尿液pH、肾脏指数和肾组织草酸含量;通过对小鼠肾脏进行HE染色、Von Kossa染色,观察肾组织病理损伤和钙盐沉积情况;通过检测肾组织超氧化物歧化酶（SOD）和谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）的活力以及丙二醛（MDA）的含量,分析防石添加剂对肾脏氧化应激的影响。结果发现:随着造模试剂的应用,造模组和3个剂量组小鼠精神状态变差,各组体重均呈缓慢上升的趋势,尽管试验早期造模组小鼠体重下降显著,随后缓慢上升,但仍与对照组差异显著（P<0.05）。造模组小鼠的肾脏指数较对照组有显著升高（P<0.05）,而各剂量组与对照组无显著差异。所有试验组的小鼠尿液pH值均低于7.00,且造模组和低剂量组小鼠尿液pH值分别约为5.62和5.75,均显著低于对照组（P<0.05）,而中、高剂量组的尿液pH值（约为6.00）与对照组（约为6.66）无显著差异。造模组的血清尿素氮、肌酐、钙和磷均显著高于对照组（P<0.05）;各剂量组的血清尿素氮略低于造模组,虽较对照组的高,但差异不显著,而血清钙显著低于造模组（P<0.05）,且与对照组的接近,血清磷均接近于造模组却显著高于对照组（P<0.05）;低剂量组的血清肌酐接近于造模组却显著高于对照组（P<0.05）,中、高剂量组的血清Cr较造模组的有所降低,虽较对照组的高,但差异不显著;各试验组之间血清镁没有显著差异;各剂量组肾脏SOD和GSH-Px活性均显著高于造模组（P<0.05）,而肾脏MDA含量较造模组均有显著下降（P<0.05）;各剂量组肾组织草酸含量显著低于造模组（P<0.05）。肾脏HE染色结果发现,各剂量组较造模组肾小球周围红细胞浸润减轻、肾小管上皮细胞水肿减缓、管腔较小、结晶量减少和炎性细胞浸润减轻;Von Kossa染色结果发现,各剂量组较造模组黑色钙盐沉积明显减少。以上结果表明,本复方防石添加剂能有效缓解草酸钙结晶引起的肾脏氧化应激及肾机能的损伤,并能减少草酸钙结晶在肾脏的形成和黏附。试验三、硒抵抗草酸钙诱导的犬肾小管上皮细胞病变的作用研究本试验研究硒抵抗草酸钙（COM）损伤犬肾小管上皮细胞（MDCK细胞）的作用。在体外通过CCK-8法筛选出草酸钙的最佳作用条件和硒蛋氨酸（SeMet）的安全浓度。在此基础上,同时将草酸钙和不同安全浓度的硒蛋氨酸处理MDCK细胞,通过检测细胞活性、细胞内的活性氧水平、OPN mRNA和蛋白的表达来评估硒抵抗草酸钙对MDCK细胞损伤的作用,并探索其可能机制。结果发现:400 μg/mL的COM细胞培养液作用MDCK细胞12 h,细胞活性呈现显著性下降（P<0.05）,筛选出的SeMet安全浓度分别为1、2、4、8 μM。随着SeMet浓度升高,细胞内活性氧标记越来越少。各安全浓度的SeMet均能有效抑制由草酸钙引起的细胞OPN基因的表达,但是各浓度之间OPN基因表达的差异不显著。这些结果表明,SeMet能有效抑制草酸钙诱导的细胞内活性氧产生,且能缓解OPN的表达。