在中国胃癌是最常见的恶性肿瘤并呈逐年增加的趋势。胃癌的临床治疗效果很差,五年生存率仅仅20%,临床治疗仅仅40%的有效率。NF-κB参与调节肿瘤的凋亡和进程以及对放化疗治疗效果有关。但是它在胃癌转移中的作用没有进行详细的检测。 肿瘤转移是一个复杂的连续过程,包含肿瘤细胞脱离、转运和生长3个主要环节。其中肿瘤侵袭与血管形成是形成肿瘤转移的关键性因素,阻断任何一个环节都可抑制转移。近年来肿瘤研究最具有意义的成果之一就是证实核转录因子—κB(Nuclear transcription factor kappa B, NF-κB)在调控肿瘤侵袭转移过程中起着重要的作用。 在胃癌的侵袭核转移进程中,基底膜和细胞外基质的降解是一个最重要的特征。人类类肝素酶(heparanase),一种特异地参与硫酸乙酰肝素的清除的内切糖苷酶,已有报道该基因在功能上参与肿瘤细胞的侵袭和转移。尿激酶型纤溶酶原激活物(uPA)是一种参与细胞外基质降解的重要的酶。uPA增强了对细胞外基质的降解,使癌细胞易于向组织深层和和脉管浸润,从而导致远处转移,是预测肿瘤转移的一个重要标志物。研究表明肿瘤侵袭和转移依赖于蛋白水解系统的协同作用,胃癌组织中uPA和MMP-9mRNA表达有很好的相关性,胃癌侵袭进展中的蛋白水解反应是uPA和MMP-9共同作用的结果。MMPs(基质金属蛋白酶)的产生和活动是肿瘤细胞侵袭和转移的一个很重要的方面,在肿瘤组织中MMPs已经被一再地证明是高水平表达的。 最近有报告证实在肿瘤细胞系中NF-κB调节类肝素酶的表达,提示NF-κB信号转导途径中肿瘤转移进程中的重要作用。可是没有胃癌中NF-κB激活和是否调节类肝素酶的有用的信息。试验表明NF-κB在前列腺癌等肿瘤细胞中参与调节MMP-9的表达调节。同样有研究表明在胰腺癌细胞中NF-κB的激活参与调节uPA的表达。然而,没有胃癌中NF-κB的激活与MMP-9和uPA基因表达关系之间的报道。 我们推测参与胃癌细胞外基质降解的三个重要的基因——类肝素酶、MMP-9和uPA,浙江大学博士学位论文均受核因子NF一KB的调节。 在我们的试验中将检测N卜KB在胃癌组织中是否是持续激活的,分析NF-KB激活与临床病理特征的关系,以及NF一KB激活与转移相关基因类肝素酶、MMp一9和upA表达之间的相关性。同时利用pCDNA3.1(--)一Ml妞a质粒转染胃癌细胞株稳定表达Ml出a蛋白,抑制NF一KB的激活。将pCDNA3.1(一MI妞a质粒转染高分化、中分化和低分化的胃癌细胞株,通过与未转染的细胞株的对比,观察阻断NF一KB对下游转移相关基因表达的影响,并通过Boyden小室实验检测其对细胞侵袭能力的影响。本论文的内容分以下两个部分:第一部分:胃癌临床标本中NF一KB和肿瘤转移相关基因的表达及相关性 目的:检测45例胃癌标本中NF-KB是否激活及其表达与转移相关基因类肝素酶、MMP一9和uPA表达之间的相关性,以及各个基因表达与临床病理特征的关系。 方法:采用免疫组织化学、荧光定量PCR、DIG一EMSA等方法。 结果:RelA(N「一KB)在癌组织细胞核中表达阳性,且其表达明显高于癌旁组织和远癌组织细胞核的表达;Re认(NF一KB)的激活与淋巴浸润、病理分期,侵袭深度相关。类肝素酶mRNA和MN于一9 mRNA在胃癌组织的表达远高于癌旁和远癌正常组织的表达,而u以mRNA表达在癌组织、癌旁和远癌正常组织中的表达相近。类肝素酶mRNA的表达与肿瘤侵润深度、分化程度、肿瘤大小、肿瘤的血管、淋巴管和神经浸润、远处转移等病理特征相关;MMP一9 mRNA表达与血管浸润、肿瘤侵袭深度和年龄相关;uPA mRNA表达与血管浸润、淋巴管浸润、神经浸润、肿瘤大小、肿瘤侵袭深度、T分期、淋巴结转移有无和转移数目、肿瘤分期具有相关性。N卜KB与类肝素酶和uPA mRNA的表达具有相关性,而与MMP一9 mRNA的表达无相关性。 结论:NF一KB在胃癌组织中是持续激活的,与类肝素酶、uPA的表达具有相关性。NF一KB以及其调节的下游基因的表达与胃癌侵袭和转移相关的病理特征相关。第二部分:胃癌细胞系中NF术B与肿瘤转移相关基因的表达。 目的:研究抑制NF一妞的激活对转移相关基因表达和胃癌细胞侵袭能力的影响。 方法:采用质粒、转染荧光定量PCR、细胞免疫组化等方法。 结果:pCDNA3.l(--)一Ml妞a质粒转染人胃癌细胞株sGC一7901、HGC一27、BGC一823第3页