【摘 要】
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目的:本实验采用葡聚糖硫酸钠(dextran sodium sulfate,DSS)制备溃疡性结肠炎(Ulcerative Colitis,UC)大鼠模型,选取其双侧“天枢”、“足三里”,采用电针针刺的方法进行干预,同时运用16Sr DNA高通量测序技术探究电针对肠道微生态的保护作用和影响的关键菌群。从肠道菌群这一角度着手研究针灸对溃疡性结肠炎的治疗作用,为深入探讨针灸治疗炎症性肠病的作用机理提供
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目的:本实验采用葡聚糖硫酸钠(dextran sodium sulfate,DSS)制备溃疡性结肠炎(Ulcerative Colitis,UC)大鼠模型,选取其双侧“天枢”、“足三里”,采用电针针刺的方法进行干预,同时运用16Sr DNA高通量测序技术探究电针对肠道微生态的保护作用和影响的关键菌群。从肠道菌群这一角度着手研究针灸对溃疡性结肠炎的治疗作用,为深入探讨针灸治疗炎症性肠病的作用机理提供实验基础。并对针灸这种多靶点、多层次的复杂体系和全面认识针灸的疗效提供深层次的理论参考和实验依据。材料与方法:健康雄性SD大鼠40只,8周龄,体重300±15g,适应性喂养3天之后,开始实验。用SPSS26.0软件随机分为空白组、模型组、电针治疗组和非经非穴组,每组各10只大鼠。空白组大鼠给予蒸馏水自由摄取,另外3组采用DSS制备溃疡性结肠炎免疫反应大鼠模型。电针组选取大鼠双侧的“天枢”和“足三里”进行电针治疗,而非经非穴组则选取双侧“天枢”和同侧第四乳头连线中点处以及“足三里”旁开5mm进行电针治疗,电针方法同电针治疗组。空白组与模型对照组只在同等时间做捆绑束缚,不进行电针干预,每次15 min,每24h一次,连续7天,在此期间模型组、电针组和非经非穴组继续自由饮用4%DSS溶液,空白组自由摄取蒸馏水。干预结束后,采取疾病活动(disease activity index,DAI)指数评分法评估大鼠结肠炎的严重程度。同时收集四组大鼠干预后的新鲜粪便进行粪便隐血测试,并采用16S r DNA扩增子测序法对肠道菌属进行菌群测量。最后,将大鼠进行腹部注射麻醉,待大鼠失去意识后进行腹部解剖,腹主动脉处插管抽取血液,并截取远端结肠及回盲部组织,对其病理形态学结构进行观察。采用SPSS 26.0软件进行统计学分析。结果:1电针干预对DSS造模的UC大鼠模型的影响(1)DSS诱导溃疡性结肠炎后,与空白组大鼠比较,模型组的基本情况不佳,毛发颜色暗淡并且没有光泽,反应力弱,并有排泄物附着在肛门周围,大便质地稀薄或呈现水样便,可见粪便内夹杂鲜血或脓血样分泌物,活动强度减弱,体重下降明显,DAI评分与空白组相比数值增加明显(P<0.05);与模型组比较,电针组的UC大鼠的活动强度增加、饮食饮水情况较好;体重有所增加、精神状况显著好转,毛色恢复光泽;便稀情况减少,再无便血情况。且DAI评分与模型组相比数值降低,差异具有统计学意义(P<0.05)。与模型组比较,非经非穴组的UC大鼠每天的活动、饮食饮水、体重、精神状态、毛色及粪便性状、便血情况均无明显差异,DAI评分与模型组相比无统计学差异(P>0.05)。(2)大鼠结肠组织病理形态学结果显示:与空白组比较,模型组大鼠的结肠组织存在大小不等的溃疡面,黏膜及黏膜下层增生并见大量中性粒细胞浸润,腺体结构排列无序;经过电针干预后,电针组大鼠结肠组织的形态学明显改善,黏膜充血情况得到改善、水肿情况也有所减轻,溃疡情况也得到了恢复,镜下所见得结肠组织腺体数目增多,并且腺体结构排列有序,炎性细胞减少或消失,黏膜上皮组织恢复其连续性;非经非穴组和模型组之间无明显差异。2肠道菌群的检测16S rDNA扩增子测序显示:与空白组相比,模型组OTUs数量降低、alpha多样性下降、beta多样性有差异,模型组肠道菌群的丰度及多样性指数明显降低(P<0.05),具有统计学意义;与模型组相比,电针组OTUs数量增多、alpha多样性、beta多样性有明显差异,电针组肠道菌群的丰度及多样性指数有明显增高(P<0.05),具有统计学意义;非经非穴组OTUs数量、alpha多样性、beta多样性亦有差异,但无电针组明显(P<0.05)。优势菌种主要归属于变形菌门(Proteobacteria)、拟杆菌门(Bacteroidetes)以及厚壁菌门(Firmicttes)这三大类。电针治疗后,相应菌群的数目均比针刺治疗前呈向正常方向转变得趋势。结论:1电针“天枢穴”、“足三里穴”对UC大鼠的DAI评分、大鼠体重、肠道组织形态学炎症表现有明显的的改善作用。2电针对UC模型大鼠肠道菌群多样性及有益菌的含量起到正向的调整作用。3电针对肠黏膜具有保护作用,并能促进肠道对营养物质的吸收,这可能是针刺影响肠道微生态的重要机制。
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