三阴性乳腺癌(TNBC,ER-/PR-/HER2-)恶性程度高,预后差,内分泌治疗及针对HER2的靶向治疗均不适合于这一亚群,因此化疗是目前针对三阴性乳腺癌唯一标准化的治疗方案,其精确的靶向治疗手段亟待开发。蛋白泛素化修饰在各种细胞生命过程,如细胞周期,细胞凋亡,受体下调以及基因转录中都具有重要调控作用。近些年来,探究肿瘤发生发展过程中泛素作用的分子机制研究也层出不穷,多个泛素系统成员与肿瘤之间的联系也逐步被揭示出来,并成为肿瘤潜在的治疗靶标。在本文的研究中,我们将近来发展迅猛的CRISPR/Cas9技术与文库筛选技术相结合,用于探寻三阴性乳腺癌细胞生长所必需的泛素修饰系统基因,一来以加深对泛素化修饰在三阴性乳腺癌发生发展中的作用研究,二来寻找三阴性乳腺癌新的治疗靶标。我们成功鉴定到了多种三阴性乳腺癌增殖必需基因,包括去泛素化酶USP28,以及凋亡相关基因BIRC6等,并选择去泛素酶USP28作为进一步研究的对象。免疫组化实验结果分析显示USP28在三阴性乳腺癌中高表达,USP28蛋白水平敲低能显著抑制多种类型三阴性乳腺癌细胞生长。分子机制研究发现USP28能够调节DNA解旋酶RecQL5的蛋白稳定性,而RecQL5蛋白敲低影响三阴性乳腺癌细胞的基因组稳定性,进而抑制细胞的增殖。我们的研究结果表明去泛素酶USP28以及DNA解旋酶RecQL5为三阴性乳腺癌细胞增殖所必需,是三阴性乳腺癌潜在的治疗靶标。