由感染、外伤等引起的年轻恒牙的牙髓病、根尖周病是口腔内科常见的疾病之一,对于年轻恒牙的牙髓病或根尖周病传统的治疗方法是根尖诱导成形术。虽然根尖诱导成形术可以促使牙根继续发育,但是丧失血运循环后的牙齿会变得很脆,较正常牙齿更容易折断或劈裂,甚至过早缺失。近些年来,随着细胞及分子生物学的发展,牙髓组织再生成为一种不仅能使受损的牙髓组织再生而且有望恢复其生理功能的生物学治疗方法。然而牙髓组织再生成功的关键是快速有效诱导血管的形成,为组织再生提供营养基础。支架材料作为组织工程的关要因素之一,是近几年研究的热点,壳聚糖在生物医学领域应用较为广泛,虽然具有良好的生物学性能,但是结构的不稳定使其在生物医学领域的应用受到一定的限制,邻苯二酚类化合物具有良好的粘附性能。因此我们设想是否可以将壳聚糖与邻苯二酚类化合物结合制备一种新的支架材料,搭载能促进血管形成的血管内皮生长因子,作为牙髓干细胞的载体,促进血管的再生,提高牙髓再生的成功率,为牙髓组织的修复提供新的治疗途径。本课题组已成功将邻苯二酚基团通过化学方法接枝到壳聚糖分子中,利用天然交联剂京尼平进行交联,制备出生物学性能良好并具有三维网状结构的邻苯二酚壳聚糖支架材料,本实验欲将邻苯二酚壳聚糖作为乳牙牙髓干细胞的载体,观察其促进乳牙牙髓干细胞在表面粘附、增殖情况,将rhVEGF165与邻苯二酚壳聚糖复合后观察其促进乳牙牙髓干细胞向血管内皮细胞方向分化的能力,为年轻恒牙牙髓再生提供一种新的支架材料。本实验通过酶联合消化法及倒置贴壁法提取乳牙牙髓干细胞,并通过细胞形态、碱性磷酸酶和茜素红染色对其进行鉴定;扫描电镜观察冻干后的壳聚糖及邻苯二酚壳聚糖的孔径结构,消毒后并用含10%FBS及1%双抗的高糖培养液预处理材料,监测培养液的pH;通过MTT法检测壳聚糖及邻苯二酚壳聚糖的生物相容性;分别将乳牙牙髓干细胞与壳聚糖及邻苯二酚壳聚糖共培养,通过扫描电镜和HE染色观察细胞在材料表面的增殖以及粘附情况,各组随机选取10个400倍视野,计算平均细胞密度,评价邻苯二酚壳聚糖是否更有利于细胞在其表面增殖及在孔径内的延伸;通过ReaL-Time PCR检测血管内皮细胞表面标记物CD31、VEGFR2、VE-cadherin的表达来检测载rhVEGF165的邻苯二酚壳聚糖支架材料对乳牙牙髓干细胞血管形成能力的影响。实验结果表明:我们成功提取了乳牙牙髓干细胞,所提取的干细胞具有典型的成纤维细胞样形态,通过碱性磷酸酶及茜素红染色证明所提取的干细胞具有较好的成骨分化能力;通过扫描电镜观察壳聚糖及邻苯二酚壳聚糖均为三维多孔状结构,但邻苯二酚壳聚糖孔径之间连接更加紧密,孔径大小更加均匀。经过材料的预处理发现处理邻苯二酚壳聚糖的培养液更快的接近中性,说明其生物相容性有所改善;MTT实验结果表明相较于壳聚糖,邻苯二酚壳聚糖具有良好的生物相容性;扫描电镜和HE染色结果发现邻苯二酚壳聚糖更有利于干细胞在其表面的粘附以及在孔径内的延伸;ReaL-Time PCR的结果显示邻苯二酚壳聚糖与rhVEGF165复合后更有利于乳牙牙髓干细胞向血管内皮细胞方向分化。综上所述,实验制备的邻苯二酚壳聚糖具有良好的生物相容性,与rhVEGF165复合后可以作为牙髓再生良好的支架材料。