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研究背景子宫内膜异位症（Endometriosis, EMs）是指具有生长功能的子宫内膜间质和腺体出现子宫体腔以外的部位。EMs是妇科常见疾病，在育龄女性中发病率约10%，在不育和慢性盆腔痛患者中发病率为35-50%。腹腔镜手术是诊断和治疗EMs的主要手段。但EMs术后易复发，据统计术后5年年均复发率约10%，其中大约50%的复发患者需要再次手术治疗。CO2是目前最常用的腹腔镜膨腹介质，研究发现CO2气腹可促进结肠癌和肝癌肿瘤细胞术后种植与转移。异位内膜组织具有侵袭、粘附、血管形成和抗细胞凋亡等类肿瘤生物学行为。那么腹腔镜手术时CO2气腹会促进内膜异位病灶形成和复发吗？研究发现，腹腔镜手术治疗子宫内膜异位囊肿患者术后复发率低于开腹手术者。前期我们通过构建大鼠EMs模型，发现CO2气腹对大鼠内膜异位病灶的粘附、侵袭和血管生成有抑制用。Hu L等分别用CO2和N2作为膨腹介质干预EMs大鼠，发现CO2气腹能缩小异位病灶体积，这和我们前期实验结果一致。目前CO2气腹机多为电子脉冲式充气模式，该充气模式下腹腔内瞬间的压力可高出设定值2.2倍。另外研究发现在模拟人类气腹程序中，大鼠气腹模型最优充气压力是5mmHg，当气压大于8mmHg时大鼠就无法用于模拟人类日常手术时的气腹情况。而我们早期以及Hu L的研究均是在电子脉冲式气腹机非恒定压力作用下得到的结果，并且作用于大鼠的气腹压力均超过10mmHg。因此本课题拟利用充气压力相对恒定的恒压变流式和电子脉冲式两种CO2气腹机作用EMs大鼠，设定气腹压力5mmHg和10mmHg，通过横向对比，进一步观察不同CO2气腹充气模式及压力对EMs大鼠成模和异位病灶复发有何影响，并对其发生、发展机制作初步探讨。第一部分不同二氧化碳气腹充气模式和压力对大鼠子宫内膜异位症模型成模的影响目的：评价不同CO2气腹充气模式和压力对大鼠子宫内膜异位症成模率、异位灶大小、组织病理学及组织相关分子生物学指标的影响。方法1、通过自体内膜移植法构建大鼠EMs模型，建模后第7天给予恒压和脉冲式两种CO2气腹充气模式干预1小时。分组：对照组（A组）、5mmHg脉冲气腹组（B组）、10mmHg脉冲气腹组（C组）、5mmHg恒压气腹组（D组）、10mmHg恒压气腹组（E组）。2、建模28天后观察大鼠EMs成模率，病灶大小。3、HE染色观察病灶组织病理学改变，免疫组化测定病灶组织ICAM-1、MMP-9和VEGF-C的表达。结果1、各气腹组EMs成模率和对照组相比无统计学差异，但异位病灶体积均显著低于对照组，差异具有统计学意义（P<0.05）。其中C组（10mmHg脉冲气腹组）病灶体积大于B、D、E气腹组，差异具有统计学意义（P<0.05）。2、各气腹组病灶组织ICAM-1、MMP-9和VEGF-C的表达均低于对照组，差异具有统计学意义（P<0.05）。其中C组（10mmHg脉冲气腹组）VEGF-C表达显著高于B、D、E气腹组，差异具有统计学意义（P<0.05）。结论在大鼠EMs病灶形成中，CO2气腹对病灶体积有抑制作用。CO2气腹对异位病灶ICAM-1、MMP-9和VEGF-C的表达均有抑制作用。但10mmHg脉冲模式气腹对病灶异位种植过程中血管生成的抑制作用较弱。第二部分不同二氧化碳气腹充气模式和压力对EMs大鼠复发病灶粘附、侵袭、血管生成相关因子的影响目的：评估不同CO2气腹充气模式和压力对EMs大鼠病灶复发率和复发病灶粘附、侵袭、血管生成相关因子的影响。方法1、选取建模成功的EMs大鼠，给予恒压和脉冲式两种CO2气腹充气模式干预1时，术毕剥除异位病灶并重新缝合。分组：对照组（A组）、5mmHg脉冲气腹组（组）、10mmHg脉冲气腹组（C组）、5mmHg恒压气腹组（D组）、10mmHg恒压腹组（E组）。2、气腹干预后4周，观察EMs大鼠病灶复发率和病灶大小。3、Real Time-PCR和Western-blot技术检测复发病灶ICAM-1、MMP-9和VEGF-C mRNA和蛋白的表达。结果1、B、D、E气腹组异位病灶复发率显著低于对照组和C组。四个气腹组复发病灶体积显著低于对照组，其中C组病灶体积又高于B、D、E气腹组，差异具有统计学意义（P<0.05）。2、各气腹组ICAM-1、MMP-9和VEGF-C mRNA和蛋白表达均显著低于对照组，差异具有统计学意义（P<0.05）。其中C组VEGF mRNA和蛋白表达高于B、DE气腹组，差异具有统计学意义（P<0.05）。结论CO2气腹可抑制复发病灶体积，并抑制病灶ICAM-1, MMP-9，VEGF-C mRNA和蛋白表达。稳定的恒压充气模式及低压力脉冲充气模式气腹可降低EMs大鼠子盆腔异位病灶复发率。第三部分不同二氧化碳气腹充气模式和压力对大鼠子宫内膜异位症模型复发病灶细胞凋亡的影响目的：评估不同CO2气腹充气模式和压力对大鼠子宫内膜异位症复发病灶细胞凋亡的影响。方法1、选取建模成功的EMs大鼠，给予恒压和脉冲式两种CO2气腹充气模式干预1小时，术毕剥除异位病灶并重新缝合。分组：对照组（A组）、5mmHg脉冲气腹组（B组）、10mmHg脉冲气腹组（C组）、5mmHg恒压气腹组（D组）、10mmHg恒压气腹组（E组）。2、气腹干预后7天，用Tunel法检测异位病灶组织细胞凋亡情况。3、Real Time-PCR和Western-blot技术检测复发异位病灶凋亡抑制因子survivinmRNA和蛋白的表达。4、透射电镜观察异位病灶细胞超微结构。结果1、B、D、E气腹组异位病灶组织凋亡指数显著高于对照组和C组，差异具有统计学意义（P<0.05）。2、各气腹组survivin mRNA和蛋白的表达均显著低于对照组，其中C组survivinmRNA和蛋白表达高于B、D、E干预组，差异具有统计学意义（P<0.05）。3、透射电镜观察：对照组异位内膜病灶细胞膜清晰完整，线粒体电子密度高，形态较好。各气腹干预组异位内膜病灶见不同程度细胞核皱缩，染色质凝集，边缘化，线粒体发生肿胀，脊紊乱，发生空泡化，肌丝走向紊乱，胞浆内糖原颗粒减少。部分细胞核凋亡，胞浆内出现大囊泡，线粒体空泡化显著，甚至破裂解体。但是C组染色质凝集及细胞核凋亡情况较其他三个气腹组轻。结论CO2气腹可促进大鼠盆腔异位内膜细胞发生凋亡，并抑制survivin mRNA和蛋白表达。稳定的恒压充气模式和低压力脉冲充气模式气腹能更好的促进异位内膜细胞凋亡。全文结论：1、5mmHg、10mmHg恒压模式CO2气腹和5mmHg脉冲模式CO2气腹可抑制EMs大鼠成模和复发的异位病灶体积，并能降低大鼠EMs复发率。10mmHg脉冲模式CO2气腹对EMs病灶复发率没有影响。2、5mmHg和10mmHg脉冲和恒压模式CO2气腹均能抑制EMs大鼠异位病灶粘附、侵袭、血管生成和抗凋亡的能力。但10mmHg脉冲模式CO2气腹对EMs病灶血管生成和抗凋亡能力的抑制作用较弱。3、稳定的恒压充气模式和低压力脉冲充气模式气腹（5mmHg）能更好的抑制异位病灶血管生成、促进异位内膜细胞凋亡及降低异位病灶复发率。