植物非特异性脂质转移蛋白（non-specific lipid transfer proteins,nsLTPs）,属病程相关蛋白。许多研究表明该蛋白可能参与植物体内许多不同的生理过程,因此研究非特异性脂质转移蛋白基因具有十分重要的意义。根据本实验室构建的西伯利亚蓼地下茎抑制消减文库,利用RACE技术从西伯利亚蓼中第一次克隆了非特异脂转移蛋白基因,并通过生物信息学手段,对该基因序列进行了分析。采用实时荧光定量PCR技术,研究了PsnsLTPs基因在西伯利亚蓼不同组织、不同时间盐碱胁迫下及去胁迫过程中的表达特性。为了进一步验证其可能的功能,构建了pROKⅡ植物表达载体,为今后功能验证打下基础。主要研究及结果如下:1.PsnsLTPs编码序列的克隆及序列分析本研究根据西伯利亚蓼地下茎抑制消减文库（SSH）中获得的非特异性脂质转移蛋白（non-specific lipid transfer protein,nsLTP）的EST序列,应用RACE技术克隆了具有PolyA的全长cDNA编码序列。其中5’非翻译区为65 bp,3’非翻译区为227 bp;开放阅读码框为302bp,编码103个氨基酸,其中31-100为nsLTP-like功能域。该基因N端第127位具有典型信号肽特征,第27位甘氨酸,第28位亮氨酸为可能的信号肽切割位点。推测的蛋白质相对分子量10.658kD,等电点5.01。2.3%NaHCO₃胁迫下及1%、0.1%、水去胁迫下PsnsLTPs的表达分析采用荧光定量PCR技术对盐胁迫及去胁迫下的PsnsLTPs的表达进行分析,结果表明,PsnsLTPs在西伯利亚蓼叶、茎、地下茎中均有表达。其中该基因在地下茎中的表达明显受盐胁迫的诱导,具有明显的组织特异性。3.植物表达载体的构建将PsnsLTPs基因与克隆载体pMD-T连接获得的重组质粒pMD-T/PsnsLTPs,PCR方法获得目的基因,利用XbaⅠ和KpnⅠ双酶切加接头,将纯化产物连入植物表达载体pROKⅡ上,将抗性筛选出的阳性克隆转化子进行菌落PCR及单双酶切鉴定验证,成功构建pROKⅡ/PsnsLTPs表达载体,为进一步的遗传转化奠定基础。