大豆球蛋白和大豆β-伴球蛋白对松浦镜鲤生长性能、肠道健康及代谢通路的影响

来源 :上海海洋大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:shanwq1983
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本试验以松浦镜鲤为研究对象,探讨大豆球蛋白(11S)和大豆β-伴球蛋白(7S)对松浦镜鲤生长性能、肠道健康因子(紧密连接蛋白、细胞凋亡信号、炎性细胞因子及信号通路)及代谢组变化规律的影响,探明11S和7S对鱼类肠道健康的影响机制。本项目从肠黏膜代谢通路这一新的视角研究大豆抗原蛋白与肠道健康,并初步探索饲粮中添加AKG对大豆抗原蛋白抗营养作用的缓解机制,这对提高大豆在水产饲料中的应用具有重要的理论价值。1研究11S和7S对松浦镜鲤生长性能的影响。选用松浦镜鲤幼鱼1080尾(4.0±0.5 g),随机分成12组,每组3个重复,每个重复30尾鱼。分别用浓度为4%(11S1)、8%(11S2)、12%(11S3)和16%(11S4)的大豆球蛋白(11S),浓度为4%(7S1)、8%(7S2)、12%(7S3)和16%(7S4)的大豆β-伴球蛋白(7S)替代鱼粉,设置鱼粉组(对照组,CON)、50%豆粕替代鱼粉的豆粕组(SBM)为对照组,另设与SBM组中含有相同含量的经纯化后的11S和7S的11+7S组以及与在11+7S组的基础上添加1%AKG的AKG组。配制成等氮等能的12种配合饲料。结果表明:与CON组相比,SBM组的增重率、蛋白质效率、特定生长率显著降低(P<0.05),饵料系数显著增加(P<0.05),其余各组与CON组差异不显著(P>0.05),各组肥满度均无显著性差异(P>0.05)。在体成分分析中,随着11S添加量的增加,粗蛋白含量呈现先降后增的趋势,其中11S1组的粗蛋白含量显著低于CON组(P<0.05),7S各处理、SBM组、11+7S组和AKG组与CON组差异不显著(P>0.05)。7S各处理中,随着添加量的增加,体脂肪含量呈上升趋势,其中7S4显著高于CON组(P<0.05),11+7S组及AKG组体脂肪含量显著高于CON组(P<0.05),11S各处理及SBM组与CON组体脂肪含量无显著性差异(P>0.05)。11S各处理体成分中水分与CON组无显著性差异(P>0.05),7S各处理随着7S添加量的增加呈下降趋势,其中7S4显著低于CON组(P<0.05),11+7S组和AKG组体成分中水分显著低于CON组(P<0.05),SBM组与CON组无显著性差异(P>0.05),AKG的添加并未对生长性能和体成分造成显著性变化(P>0.05)。2利用RT-PCR技术研究鲤鱼前、中及后肠信号通路AMPK/ACC;TOR/4EBP;细胞凋亡信号通路caspase3和caspase9;紧密连接蛋白occludin、claudin3c、claudin11和claudin7;炎性细胞因子TNF-a、IL-1β和TGFβ1各基因的表达量的影响,结果表明随着11S和7S这两种抗营养因子添加量的增加,ACC及TOR的基因表达在鲤鱼中肠及后肠均呈逐渐降低的趋势,且均与CON组差异显著(P<0.05),细胞凋亡信号通路基因表达量在鲤鱼各肠段均有不同程度的上升,炎性细胞因子中促炎性细胞因子表达量在各肠段整体呈现先增后减的趋势且后肠最为严重,两种重要的紧密连接蛋白claudin3c和occludin的基因表达量在鲤鱼后肠均有不同程度的降低,11+7S组及SBM组亦观察到相同影响。此外AKG的添加显著提高了前肠及中肠ACC基因以及各肠段TOR基因的表达(P<0.05),降低了炎性细胞因子TNF-a、IL-1β和TGFβ1在后肠中的表达,并提高了对前肠及中肠中的紧密连接蛋白occludin和claudin3c的基因表达,说明AKG能缓解大豆抗原蛋白对肠道的破坏。3利用LC-QS非靶向代谢组学对CON、11S3、7S3、11+7S、AKG组之间进行两两比较,进行差异代谢物分析,研究11S和7S及AKG对松浦镜鲤肠道黏膜代谢组的影响。结果表明:11S3组和CON组比较发现69种已定性的代谢物质存在统计学差异,对其代谢通路富集分析显示甘油磷脂代谢通路和胆碱在癌症中的代谢通路为显著变化,具有统计学意义。7S3组和CON组的比较发现54种已定性的代谢物质存在统计学差异,对其代谢通路富集分析得到甘油磷脂代谢通路、亚油酸代谢通路、细胞凋亡信号通路、鞘脂类信号通路、鞘脂类代谢通路、精氨酸生物合成通路、亚麻酸代谢通路、亚油酸代谢通路为显著变化,具有统计学意义。11+7S组和CON组的比较发现69种已定性的代谢物质存在统计学差异,对其代谢通路富集分析得到PPAR信号通路、细胞凋亡信号通路、鞘脂类代谢通路、亚油酸的新陈代谢通路、甘油磷脂代谢通路为显著变化,具有统计学意义。AKG组和11+7S组进行比较发现存在51种已定性的代谢物质存在统计学差异,对其代谢通路富集分析得到精氨酸生物合成通路、泛酸和Co A生物合成通路、嘧啶代谢通路为显著变化,具有统计学意义。综上所述,得出以下结论:1.添加不同梯度(0~16%)的11S和7S未显著影响松浦镜鲤的生长性能,但会影响体成分营养物质含量。2.随着11S和7S添加量的增加,ACC及TOR的表达量在中肠及后肠呈逐渐下降的趋势,而炎性因子表达量在各肠段均呈先增后减的趋势,凋亡信号基因在各肠段有不同程度增加,而紧密连接蛋白在后肠中不同程度降低。表明11S和7S对鱼类肠道造成了破坏。3.11S和7S都对肠道黏膜的代谢产生了较大影响,增加了肠道黏膜中脂肪酸类及糖类等能源代谢物,并导致甘油磷脂代谢等代谢通路的活性显著升高。4.AKG能一定程度上缓解大豆中抗原蛋白对鲤鱼肠道的破坏,各肠道健康相关基因表达水平均有一定程度的恢复,并加强肠道黏膜中脂肪酸相关代谢通路。
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