背景艾滋病是一种严重威胁人类健康的传染性疾病,目前尚无有效的治愈方案和安全可靠的疫苗。高效联合抗逆转录病毒治疗在控制HIV-1感染过程中发挥了重要作用,但未能实现人类彻底终结艾滋病的目标。能够诱导出HIV-1广谱中和抗体的疫苗是遏制艾滋病蔓延最有效的工具,近几年的研究发现HIV-1广谱中和抗体能预防感染、降低感染者的血浆病毒载量、减缓疾病进程。HIV-1广谱中和抗体的分离和鉴定已成为艾滋病免疫学研究热点,分离出的广谱中和抗体,不仅能直接用于艾滋病的预防和治疗,还能帮助我们回答广谱中和抗体的产生机制及进化路径等关键科学问题,从而为免疫原的设计提供更科学的依据。目的构建用于膜蛋白特异性B细胞分选的HIV-1 CRF07＿BC亚型gp140分子探针（CN54 gp140-Avi）,从我国HIV-1感染者外周血单个核细胞（PBMCs）中分选特异性记忆B细胞进而获得单克隆抗体,并进一步鉴定抗体的结合能力、中和能力以及介导的细胞毒性作用等生物学特性。方法1.利用实验室保存的Pfuse-CN54 gp140真核表达质粒为模板,通过PCR方法构建特异性分子探针（CN54 gp140-Avi）,并进行生物素化;2.利用生物素化的分子探针从HIV-1 BC亚型感染者的PBMCs中分离出膜蛋白特异性记忆B细胞,采用反转录聚合酶链反应（RT-PCR）分别扩增出Ig G的重链和轻链可变区基因;3.通过IMGT数据库进行抗体基因家系分析,找出可配对的抗体轻重链可变区基因,并克隆入表达载体;4.将轻重链质粒1:1共转染293F细胞制备单克隆抗体;5.通过ELISA方法检测抗体结合能力;6.通过TZM-bl细胞-假病毒系统测定单克隆抗体的中和能力;7.依赖流式细胞术检测抗体介导的细胞毒性作用。结果1.成功构建出CN54 gp140-Avi生物素化分子探针,采用该分子探针对HIV-1 BC亚型感染者（编号为CBJB363）的PBMCs样本进行单个B细胞流式分选,共得到29个B细胞;2.96孔板中收集到Ig G轻重链基因序列可配对的B细胞分别为B3、B4,经反转录聚合酶链反应（RT-PCR）分别扩增Ig G的重链和轻链可变区基因,使用IMGT数据库进行基因家系分析,最终得到一个单克隆抗体CBJB363-B4。3.经基因家系比对,B4抗体重链来源于IGHV1-3*01F家系,轻链为Lambda链,属于IGLV1-40*01F家系,体细胞突变率均较低。4.CBJB363-B4抗体可以很好地结合gp140蛋白,对RSC3蛋白有一定的结合活性,而无法结合ΔRSC3。5.抗体中和试验结果显示B4抗体可以有效中和MW965、X2278、398-F1毒株,其50%抑制浓度(IC₅₀)分别为7.2、3.83、17.08μg/m L,中和宽度约为30%。6.B4抗体可介导一定的细胞毒性作用,浓度在50μg/m L时,靶细胞杀伤率可达65.1%。结论成功制备出具有生物学活性的CN54 gp140-Avi探针,并获得具有中和活性的单克隆抗体CBJB363-B4。利用该分子探针,我们未来有望获得较多更强中和能力的抗体,为开发艾滋病抗体药物和基础疫苗学研究等领域提供新的工具和思路。