戊型肝炎病毒(Hepatitis E virus,HEV)是引起全球多地区大规模流行和散发病例的急性病毒性肝炎的病原体。我国属于戊型肝炎(Hepatitis E,HE)的高发区。基因Ⅳ型HE是一种人畜共患病,能在人和牲畜之间引起交叉感染。因此,基因Ⅰ型和基因Ⅳ型HEV感染机制差异性的研究成为各国学者研究的焦点。本研究采用PCR技术扩增基因Ⅳ型HEV开放阅读框2(Open Reading Frames 2,ORF2)的两个缺失突变体基因,然后将突变体基因分别亚克隆到大肠杆菌表达载体上。重组质粒经酶切鉴定后转化大肠杆菌ER2566。重组菌经过IPTG诱导表达后的SDS-PAGE结果显示:表达蛋白以包涵体形式存在,其相对分子质量分别约为24 kDa和27 kDa。表达的2个重组蛋白分别称为p24蛋白和p27蛋白。包涵体蛋白洗涤纯化后,SDS-PAGE结果显示:洗涤后的包涵体蛋白在4 mol/L尿素/buffer Ⅰ溶液中溶解性好,并且能以单体和二聚体的形式存在。Western Blot检验结果显示:复性蛋白与单克隆抗体8C11和HE 阳性血清有很强的反应性,表明p24和p27蛋白都具有良好的免疫反应性。复性蛋白经过离子交换层析和分子筛层析纯化后,SDS-PAGE结果显示重组蛋白的纯度超过了 99%;p24蛋白的回收率约为26%,p27蛋白的回收率约为31%。用纯化后的p24和p27蛋白作为包被抗原检测HE阳性血清和HE阴性血清。间接ELISA结果显示,p24和p27蛋白对HE阳性血清和HE阴性血清检出率与北京万泰公司的抗HEV-IgG检测试剂完全相同。非变性凝胶电泳和Western Blot结果显示p27蛋白电泳后,大部分蛋白位于浓缩胶和分离胶之间,表明p27蛋白可能形成了一种相对分子质量大的蛋白多聚体。利用动态光散色仪测定p24蛋白的平均水化半径约为7 nm,p27蛋白的平均水化半径约为22 nm;透射电镜观察负染的p24和p27蛋白,结果显示p27蛋白可以直接形成直径约为20 nm左右的类病毒颗粒,p24蛋白不能形成颗粒;原子力显微镜观察p27蛋白,同样可见直径为20 nm左右的类病毒颗粒。这些结果都表明p27蛋白已经形成了类病毒颗粒,而p24蛋白不能形成类病毒颗粒。纯化后的p27蛋白经弗氏完全佐剂吸附后分别以10μg/只、2μg/只、0.4 μg/只和0.08μg/只的剂量免疫BALB/c小鼠。间接ELISA检测结果显示,p27蛋白作为疫苗免疫小鼠的半数有效剂量(ED50)为0.59μg,同时也说明p27蛋白具有良好的免疫原性。结果表明,本研究利用大肠杆菌表达的p27蛋白能模拟基因Ⅳ型HEV的空间结构,为进一步研究基因Ⅰ型和基因Ⅳ型HEV感染机制的差异性奠定了坚实的基础。