人参皂苷是人参的功效成分,具有多方面的生物活性,由苷元(四环或五环三萜)与糖基两部分组成,当其中一部分糖基降解后,人参皂苷会转化为次级人参皂苷,而全部糖降解掉以后转化为皂苷元。原人参二醇型人参皂苷具有增强免疫力、抗疲劳、抗肿瘤、抗缺氧、抗衰老、降血糖等多种药理作用。研究发现,原人参二醇型人参皂苷的抗肿瘤活性要好于原人参三醇型人参皂苷,且活性的强弱还受连接糖基数量的影响,单糖苷活性最强,二糖苷、三糖苷的活性依次减弱。截止目前,在几种主要的原人参二醇型次级人参皂苷中,20(S)-人参皂苷Rh2和20(R)-人参皂苷Rg3制备方法比较成熟,但20(R)-人参皂苷Rh2和20(S)-人参皂苷Rg3尚无可实现大规模生产的制备方法。本文的研究目的在于找到20(R)-人参皂苷Rh2和20(S)-人参皂苷Rg3的制备方法,为其生物活性研究以及R/S异构体的生物活性对比研究提供单体化合物。首先,以三七茎叶皂苷为原料,分别制备了其酸、碱降解产物,再分别以柱层析和重结晶等分离手段,得到了四个降解产物单体,利用理化性质及NMR等波谱学手段鉴定了它们的结构,分别为20(S)-人参皂苷Rh2、20(R)-人参皂苷Rh2、20(S)-人参皂苷Rg3和20(R)-人参皂苷Rg3,为后续制备工艺考察与含量测定等实验内容提供了目标物的标准品。在上述研究的基础上,本文以三七茎叶皂苷为原料,通过单因素考察与正交试验,先后确立了制备20(R)-人参皂苷Rh2和20(S)-人参皂苷Rg3的最佳降解条件。实验结果如下:制备20(R)-人参皂苷Rh2最佳降解条件为:使用浓度为20%醋酸溶液(V/V,m L/m L),料液比(m/V,g/m L)为1:50,于90℃降解1.5h。在此条件下,原人参二醇型人参皂苷(Rb1、Rb2、Rb3、Rc和Rd)转化为20(R)-人参皂苷Rh2的转化率为10.7%。制备20(S)-人参皂苷Rg3的最佳降解条件为:使用Na OH甘油溶液降解,料液比(m/V,g/m L)为1:15,Na OH浓度(m/V,g/m L)为16%,于210℃降解40min。在该条件下,原人参二醇型人参皂苷(Rb1、Rb2、Rb3、Rc和Rd)转化为20(S)-人参皂苷Rg3的转化率为34.80%。以上两种次级人参皂苷的最佳降解条件,均可产生单一构型的目标产物,克服了文献报道的其他制备方法其反应产物为S和R构型混合物的缺点,且均具有转化率较高的优点,为原人参二醇型次级人参皂苷的制备提供了有价值的参考。到目前为止,制备原人参二醇型次级人参皂苷均采用降解总皂苷、原人参二醇组皂苷或原人参二醇皂苷单体的方法。为探究在提取人参皂苷的过程中将原人参二醇组人参皂苷直接降解为次级人参皂苷的可能性,本文首次尝试了用酸溶液直接提取西洋参茎叶的方法,考察了提取过程中20(S/R)-人参皂苷Rg3、Rh2四种次级人参皂苷的生成情况。具体通过单因素以及正交试验等手段,考察了利用醋酸水溶液提取西洋参茎叶来获得上述四种次级人参皂苷的最优条件。实验结果表明,其最优提取条件为:采用50%醋酸溶液(V/V,m L/m L),西洋参茎叶与醋酸溶液的料液比(m/V,g/m L)为3:50,于80℃提取1h。在此条件下,原人参二醇型人参皂苷(Rb1、Rb2、Rb3、Rc和Rd)转化为四种次级皂苷的总转化率为33.4%,其中20(S)-Rg3和20(R)-Rg3转化率较高,分别为12.3%和14.8%,而转化为20(S)-Rh2和20(R)-Rh2的转化率较低,分别为3.0%和为3.3%。本研究证明了提取与降解能够同时完成,为利用西洋参茎叶直接获得原人参二醇型次级人参皂苷提供了一种新的思路。此外,为保证上述研究过程中含量测定结果的准确性,本文建立了同时测定提取液中20(S)-Rh2、20(R)-Rh2、20(S)-Rg3和20(R)-Rg3四种次级人参皂苷的HPLC分析方法,并进行了方法学验证,实验结果表明,在选择的色谱条件下,四个次级人参皂苷的检测限在0.46~0.52μg/m L之间,平均加样回收率在98.54~102.09%(n=6)范围内,其RSD值均小于2%,表明本方法准确度高、精密度好,灵敏度高。总之,本文首次以三七茎叶皂苷为原料,对20(R)-人参皂苷Rh2和20(S)-人参皂苷Rg3两种原人参二醇型次级人参皂苷的制备方法进行了深入研究,考察了影响因素,确立了最优条件。同时以西洋参茎叶为原料,考察并证实了在提取过程中直接将原人参二醇型人参皂苷转化成次级皂苷的可能性。本文的研究结果为次级人参皂苷的制备与应用提供了新的科学依据。