【摘 要】
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背景:环状RNA(circular RNA,circRNA)是一类具有闭合环状结构的非编码RNA(non-codingRNA,ncRNA),在真核生物中有着丰富的表达,其生成机制、生物学作用以及与疾病的关系成为近几年研究的热点。circRNA主要产生于外显子的反向剪接,并且会与线性RNA的形成起到相互竞争的关系。目前研究显示,circRNA在调控miRNA表达、基因转录以及蛋白质翻译等多个生物学过
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背景:环状RNA(circular RNA,circRNA)是一类具有闭合环状结构的非编码RNA(non-codingRNA,ncRNA),在真核生物中有着丰富的表达,其生成机制、生物学作用以及与疾病的关系成为近几年研究的热点。circRNA主要产生于外显子的反向剪接,并且会与线性RNA的形成起到相互竞争的关系。目前研究显示,circRNA在调控miRNA表达、基因转录以及蛋白质翻译等多个生物学过程中均可发挥作用,并且可以在包括肿瘤在内的多种疾病中发挥生物学效应。方法:本实验利用高通量测序技术在3对肺腺癌及癌旁组织中进行circRNA筛选,我们从筛选结果选取出hsa_circ_0001640进行进一步研究,测序结果提示hsa_circ_0001640在肺腺癌组织中的表达存在明显下调。我们利用实时荧光定量技术进一步在90对肺腺癌及癌旁组织对hsa_circ_0001640的表达情况进行定量验证,并利用配对t检验的方法分析比较其在肺腺癌和癌旁组织中的表达情况。结合患者的临床数据,我们通过独立样本t检验、单因素方差分析等统计学方法,分析hsa_circ_0001640的表达与患者的临床特征之间的关系。然后对肺腺癌患者术后3年的生存期进行统计单因素及多因素分析。我们选用A549及H1299两种细胞株进行肺腺癌的体外实验,先后应用CCK-8细胞增殖毒性试验、克隆增殖实验以及transwell侵袭实验等验证hsa_circ_0001640对肺腺癌细胞的增殖侵袭能力的影响,并分析细胞周期在实验组中的变化。结果:qRT-PCR结果显示hsa_circ_0001640在肺腺癌组织中的表达出现明显的下调(P<0.001),并与患者的临床分期、淋巴结转移、以及患者的术后3年预后呈现负相关性。在多因素生存分析中,我们发现患者的术后3年生存期与临床分期及hsa_circ_0001640表达高低具有相关性,其中临床分期是患者术后3年生存期的危险因素,hsa_circ_0001640是患者术后3年生存期的保护因素。在体外实验中,hsa_circ_0001640也表现出了明显的抑癌作用,并且可以将肺腺癌细胞的细胞周期停留在G1期,hsa_circ_0001640表达的上调可以引起肺腺癌细胞的生长和侵袭能力减弱。结论:hsa_circ_0001640具有抑癌作用,可以通过调控肺腺癌细胞停留在G1期,显著抑制肺腺癌细胞的生长侵袭能力,并且与肺腺癌患者的临床分期以及术后3年预后之间存在明显的负相关性。
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