可得然胶(Curdlan)是一种由葡萄糖以β-1,3-D-糖苷键线性连接而成的水不溶性多糖,具有加热成胶特性,又被称为热凝胶多糖。作为一种食品添加剂,可得然胶广泛应用于食品工业,改善食品的持水性、黏弹性和稳定性。目前可得然胶生产菌株产量低,生产成本较高。为了提高可得然胶产量,本文以产可得然胶菌株CA03为研究对象,建立了紫外诱变和亚硝基胍诱变筛选方法和可得然胶菌株高通量筛选方法;同时通过对培养基组分的优化进一步提高可得然胶产量,为大规模工业化生产可得然胶奠定基础。本文主要研究结果如下:(1)产可得然胶菌株的诱变选育以土壤杆菌CA03为出发菌株,建立的紫外诱变条件为:紫外灯功率为15W,照射距离30cm,诱变时间30s,致死率为99.7%,形态正突变率为0.23%。从67200株菌中筛选出一株可得然胶粗提得率为45.5 g/L的高产菌株UV150824-02,较出发菌株CA03粗提得率42.0 g/L提高了 8.3%。亚硝基胍诱变:出发菌株UV150824-02,所得亚硝基胍诱变条件为:亚硝基胍浓度为0.7mg/mL,作用时间为30in,作用pH为8.5。从105000株菌中筛选到3株高产菌株。其中菌株NTG160615-05的可得然粗提得率为53.2g/L,比出发菌株UV150824-02粗提得率45.5g/L提高了 16.9%,较CA03粗提得率42.0 g/L提高了 26.7%。(2)高产菌株可得然胶特性及发酵培养基优化通过红外光谱分析证明了 3株高产菌株所产可得然胶结构与标准品一致。通过质构分析证明高产菌株产可得然胶的凝胶特性达到国家标准。对NTG160615-05菌的发酵培养基进行了优化。单因素实验表明,培养基的最佳碳源为蔗糖、氮源为NH4Cl、磷酸盐为KH2PO4。正交实验优化所得发酵培养基组成为:7%蔗糖、0.162%NH4Cl、0.1%KH2PO4、0.345%K2HPO4、0.1MgSO4·7H2O、0.4%玉米浆、0.2%CaCO3。经发酵验证,菌株 NTG160615-05在优化后的培养基中可得然胶产量(46.9g/L)较优化前(38.0g/L)提高了 23.4%。(3)可得然胶菌株高通量筛选方法建立建立的可得然胶微量检测条件为:1.0mol/L NaOH,2.0mg/mL苯胺蓝,0.5 mol/L pH值为7的磷酸缓冲液,反应90min,检测波长为550nm。采用该方法测定发酵液中可得然胶含量与干重法测定可得然胶粗提产量的相关性良好(R2=0.8626),该方法可以替代干重法来对菌株产量进行定量分析。建立了 48孔板菌株发酵筛选体系。发酵条件为:装液量1mL,250rpm、30℃培养48h,测定可得然胶含量。48孔板发酵筛选体系与摇瓶发酵筛选体系的结果有良好的相关性,变异系数在10.3%的合理范围内,可以用该发酵体系代替摇瓶发酵初筛体系。