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目的X盒结合蛋白1(X-box binding protein 1,XBP1)是内质网信号通路中的一个重要转录因子,通过构建XBPls真核表达载体pcDNA3.1(-)-XBP1s和靶向XBPls的RNA干扰质粒pSUPER-XBP1s,针对正常肝细胞L02、肝癌细胞HepG-2和HeLa细胞,研究XBPls与细胞增殖及凋亡的关系。方法(1)运用Trizol法从HepG-2细胞中提取总RNA,RT-PCR扩增出目的片段XBPls;利用TA克隆技术将目的基因克隆到pGEM-T载体上,构建成重组载体pGEM-T-XBP1s;利用分子克隆技术构建真核表达载体pcDNA3.1(-)-XBP1S。(2)人工合成两对RNAi序列,插入到空质粒pSUPER中,构建RNA干扰质粒pSUPER-XBP1s。(3)将两种重组质粒、对照空质粒分别用脂质体转染法转染肝癌细胞HepG-2,用RT-PCR检测XBPls基因mRNA在转染前后的表达水平变化,用Western blot检测XBP1s蛋白在转染前后的表达水平变化。(4)将两种重组质粒、对照空质粒转染至正常肝细胞L02和肝癌细胞HepG-2, MTT、细胞计数观察XBP1s与细胞增殖之间的关系；以内质网应激诱导剂衣霉素Tm和毒胡萝卜素Tg刺激细胞建立内质网应激(ER Stress)细胞模型,后转染两种重组质粒,设多组对照,运用免疫组化、HE染色、流式细胞仪检测周期及凋亡情况、电镜观察凋亡细胞形态等方法研究XBP1s与细胞凋亡之间的关系。结果(1)成功构建真核表达载体pcDNA3.1(-)-XBP1s和RNA干扰质粒pSUPER-XBP1S。(2)pcDNA3.1(-)-XBP1s转染HepG-2细胞后,mRNA和蛋白水平与对照组相比均有增加,差异有统计学意义(P<0.05)；pSUPER-XBP1s能有效抑制HepG-2细胞中XBP1s基因的转录和表达,与对照组相比差异有统计学意义(P<0.05)。(3)两种重组质粒转染L02细胞和HepG-2细胞后,细胞增殖率及细胞增殖数与对照组相比差异有统计学意义(P<0.05)。(4)免疫组化和HE染色结果表明,内质网应激条件下,与对照组和转染pcDNA3.1(-)-XBP1s组相比,转染pSUPER-XBP1s可以使XBP1s在细胞中表达减少并且改变了细胞形态。(5)细胞周期检测结果表明,与对照组相比,转染pSUPER-XBP1s组导致停留在S期的细胞大量减少,而转染pcDNA3.1(-)-XBP1s组导致停留在S期的细胞有所增加,差异有统计学意义(P<0.05)；细胞凋亡结果表明,与对照组相比,正常状态下转染pSUPER-XBP1s导致细胞凋亡,内质网应激(ER Stress)状态下转染pSUPER-XBP1s导致细胞凋亡率升高,而转染pcDNA3.1(-)-XBP1s导致凋亡减少,差异均有统计学意义(P<0.05)；电镜结果表明内质网应激状态下转染pSUPER-XBP1s观察到细胞中出现凋亡小体。结论成功构建真核表达载体pcDNA3.1(-)-XBP1s和RNA干扰质粒pSUPER-XBP1s；XBP1s基因的上调和下调影响细胞中XBP1s的转录和表达,并且进一步影响细胞增殖能力；内质网应激状态下,抑制XBP1s促进细胞凋亡,而增加XBP1s表达能减少细胞凋亡。