TAK1siRNA对类风湿性关节炎患者滑膜细胞MMP1和TNF-a表达的影响

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材料与方法:  一、实验材料  1、12例标本来源:中国医科大学附属第一医院骨外科住院手术患者(住院时间2012年11月-2013年2月)。以上手术患者诊断都符合美国风湿病学会1987年提出的RA诊断标准,术前均已经过伦理学认证通过。  2、免疫组化染色试剂盒  3、DharmaFECT siRNA转染试剂盒  4.ELISA试剂盒  二、实验方法  1、细胞培养  RA患者滑膜细胞进行培养,用于实验或传代。  2、细胞鉴定  将培养至三代的滑膜细胞进行免疫组化鉴定:  (1)取贴满细胞的盖玻片,用10%甲醛溶液固定30min,晾干,  (2)用PBS冲洗三次,再加入3%H2O25-10min,PBS冲洗,再加入正常善养血清,于室温静置10-15min,倾去,勿洗,甩干后,加一抗过夜,  (3)滴加辣根过氧化物酶,于室温孵育10min,PBS冲沈3x3min,用DAB显色,当显色完全后复染,脱水,封片。  3、细胞转染  严格按照试剂说明书规定,将滑膜细胞随机分组后,进行细胞转染。  4、ELISA检测  5、统计学分析  实验结果:  本研究发现:运用转染技术抑制转化生长因子β激活激酶(TAK1)在类风湿关节炎滑膜细胞中的表达后,可发现MMP1和TNF-a的表达有不同程度的降低。  结论:  在类风湿关节炎患者滑膜细胞中转染TAK1sIRNA后,可以抑制MMP1和TNF-a的表达。
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