【摘 要】
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精原干细胞可以通过自我更新维持其数量的相对恒定,同时又能通过定向分化而产生精子,以维持雄性动物的生殖功能。精子发生的整体过程非常复杂,涉及很多基因的时序性表达调控,而长
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精原干细胞可以通过自我更新维持其数量的相对恒定,同时又能通过定向分化而产生精子,以维持雄性动物的生殖功能。精子发生的整体过程非常复杂,涉及很多基因的时序性表达调控,而长链非编码RNA(long noncoding RNA,lncRNA)能够调控基因的表达,具有非常广泛的生物学功能。但是到目前为止,关于lncRNA影响小鼠雄性生殖的研究报道甚少。lncRNANEAT1可以作为核心组分介导形成旁斑结构(paraspeckle)进而调控mRNA的加工与出核表达。目前已发现NEAT1能够通过调控重要基因的时序表达而影响人胚胎干细胞的命运决定,但尚不清楚NEAT1在生殖细胞中的功能。本研究构建了针对该lncRNA的慢病毒干扰载体,通过将干扰慢病毒注射到小鼠睾丸曲细精管的方法探索了NEAT1在小鼠精子发生过程中的作用。主要研究结果如下:(1)对NEAT1转录本进行了生物信息学分析;(2)NEAT1在小鼠睾丸组织和GC-1细胞系中均表达。(3)设计干扰NEAT1的shRNA和对照组shRNA序列并成功构建CD513B-U6干扰载体;利用第三代慢病毒包装系统包装出具有良好干扰效果(使NEAT1表达下调69%)的慢病毒。(4)干扰病毒注射组和对照组的睾丸指数统计结果显示干扰组的小鼠睾丸指数轻微增大,但是统计数据结果显示其差异不显著;干扰病毒注射组有精子发生的曲细精管比例为86%,与对照组(对照组比例为97%)相比显著下降,说明敲低NEAT1后会影响小鼠的精子发生。
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