【摘 要】
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目的:大量研究证据表明,自噬和凋亡与心血管疾病有关,microRNAs（miRNAs）通过调节细胞凋亡和自噬,在心血管疾病的病理过程中发挥着关键作用。本研究旨在探讨miR-142-5p在心肌细胞自噬和凋亡中的作用。方法H9c2细胞在缺氧复氧（H/R）条件下培养,用于模拟缺血条件下的细胞状态。用miR-142-5p（模拟物和抑制剂）转染H9C2细胞,以检测其在心肌细胞中的功能。通过定量PCR分析评价
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目的:大量研究证据表明,自噬和凋亡与心血管疾病有关,microRNAs（miRNAs）通过调节细胞凋亡和自噬,在心血管疾病的病理过程中发挥着关键作用。本研究旨在探讨miR-142-5p在心肌细胞自噬和凋亡中的作用。方法H9c2细胞在缺氧复氧（H/R）条件下培养,用于模拟缺血条件下的细胞状态。用miR-142-5p（模拟物和抑制剂）转染H9C2细胞,以检测其在心肌细胞中的功能。通过定量PCR分析评价miR-142-5p的表达水平。应用MTT法测定细胞活性,乳酸脱氢酶法（LDH）测定细胞损伤情况。通过免疫印迹法检测B-细胞淋巴瘤2基因（Bcl-2）、Bcl-2-相关X蛋白、高迁移率族蛋白B1（HMGB1）、Beclin-1、自噬基因-相关蛋白5（Atg5）、cleaved caspase-3以及cleaved caspase-9的表达水平。免疫荧光检测自噬标记的LC3的表达。通过双荧光素酶报告基因检测方法验证MiR-142-5p的靶基因。结果:结果显示,H/R条件下心肌细胞miR-142-5p表达水平显著下调。用miR-142-5p抑制剂转染细胞后,通过LDH和MTT检测发现心肌细胞的损伤增加。凋亡蛋白的表达水平与LDH和细胞活力测定的结果一致。而在H/R条件下,心肌细胞转染miR-142-5p模拟物可以有效逆转H/R所诱导的心肌细胞损伤。上述结果提示miR-142-5p表达下降可能参与了 H/R所诱导的心肌细胞损伤。此外,心肌细胞在H/R条件下,或者转染miR-142-5p抑制剂可诱导自噬增强,而转染miR-142-5p模拟物可以显著逆转H/R诱导的自噬。进一步研究发现Beclin-1以及HMGB1是miR-142-5p的靶基因,miR-142-5p可以在转录后水平抑制Beclin-1以及HMGB1蛋白和mRNA的表达。双荧光素酶报告基因检测数据证实了 miR-142-5p可以负向调控Beclin-1以及HMGB1的表达,从而调控心肌细胞自噬和凋亡的诱导。结论1.心肌细胞在缺氧复氧的条件下,miR-142-5p表达下降;2.miR-142-5p可以负向调控HMGB1以及Beclin-1蛋白表达;3.miR-142-5p下降导致HMGB1以及Beclin-1蛋白表达升高从而促进心肌细胞自噬和凋亡。因此,miR-142-5p可以被认为是心肌缺血的潜在治疗靶点。
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