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天然的胰岛素生长因子1(IGF1)是由是由70个氨基酸组成的单链碱性多肽,本实验在IGF1前端加了13个氨基酸,并且把IGF1的第三位Glu(E)用Arg(R)代替,称作LR3-IGF1;这种重组类似物在体外与天然的IGF1相比能更好的与受体结合来调节细胞的生长发育,可用于体外细胞表达外源蛋白的大规模培养及临床辅助用药。本实验先把LR3-IGF1基因克隆至大肠杆菌表达载体pET32a中,经筛选、序列测定和酶切鉴定证实表达载体pET32-LR3-IGF1构建成功。重组的胰岛素样生长因子在Rosetta(DE3)plysS中获得了高效表达,目的蛋白约占菌体总蛋白的30%,40L发酵罐中的蛋白质水平可达1.73g/kg。菌体经超声破碎制备包涵体,经变性、复性,SP-F.F、Phenyl-F.F层析和Sephacryl S-100凝胶过滤三步纯化,得到分子量为9.1kD单一条带的目的蛋白,经高效液相HPLC分析纯度达到98%,目的蛋白的收率为30%,生物活性鉴定重组的胰岛素样生长因子具有刺激Bale/3T3细胞增长的特异性,其ED50在1.0ng/ml左右;本实验还根据中国药典对纯化品的杂质含量进行了测定,产品质量达到药用级别,还进行了稳定性保护剂的研究,其冻干制剂可在2-8℃保存1年。