论文部分内容阅读
三聚氰胺是一种有机化工原料,含有一个三嗪类杂环,广泛应用于合成塑料、染料、化肥、餐具、面料等。三聚氰胺和甲醛缩合生成密胺树脂,一种非常耐用的热固性塑料。如果与树脂混合,三聚氰胺因燃烧释放氮气而具有阻燃性能。因三聚氰胺含氮量高,添加到食品中,可能会导致食物蛋白含量虚假的检测结果；所以三聚氰胺常被非法添加到食品当中,以增加食品的表观蛋白含量。动物喂养含三聚氰胺超标的食品可引起肾功能衰歇,甚至死亡。动物食品中三聚氰胺残留也会危害人类健康。三聚氰胺作为食品添加剂很难被微生物所降解,这可能引起水资源和土壤不同程度的被三聚氰胺污染。2008年9月,发生在中国有关三聚氰胺食品安全问题：奶粉中混有三聚氰胺,不同程度的给人们带来危害,特别是婴幼儿人群。“三鹿奶粉”事件爆发后,引起研究人员对三聚氰胺毒性的关注。本研究首先研究三聚氰胺对斜生栅藻的毒性效应。采用光照培养箱培养斜生栅藻,以甘油为溶剂,添加不同浓度的三聚氰胺。结果显示,当三聚氰胺的浓度在50、200mg·L-1时,对斜生栅藻生长有促进作用,在750mg·L-1时则表现出抑制效应；处理7d后对叶绿素的影响和对藻密度的影响一致,显示浓度--效应关系：浓度越高抑制效应越明显。三聚氰胺对斜生栅藻超氧化物歧化酶(SOD)的影响为：当三聚氰胺浓度为200mg·L-1时酶的活性达到峰值,然后开始下降,在750mg·L-1SOD活性与对照相比减少了43.6%,三聚氰胺对斜生栅藻脂质过氧化产物丙二醛(MDA)的影响和对可溶性糖的影响是一致的,即随着浓度的增加而减少。结果表明,超氧化物歧化酶(SOD)对三聚氰胺的毒性反应最敏感,可作为水生生态系统的安全风险评估的潜在生物标志物。三聚氰胺分子量为126.12可作为半抗原。本研究采用戊二醛法,将三聚氰胺与载体蛋白牛血清白蛋白(BSA)和卵清白蛋白(OVA)分别进行偶联,制备出人工免疫抗原和检测抗原。采用皮下多点注射的免疫方法免疫BALB/c小鼠,经8次免疫后,摘眼球取血,免疫血清经辛酸--硫酸铵沉淀法纯化,间接ELISA方法进行效价测定,免疫小鼠血清效价为1：1600。对其反应条件进行了优化。此多抗的ELISA的最适检测条件：最适包被原浓度为4ug/ml,3%脱脂奶为最佳封闭液。在优化后的反应条件进行标准品的间接竞争ELISA特异性,三聚氰胺同CAAT和人工半抗原的交叉反应率(CR)分别为：193%和146%。本研究旨在发展一种快速、灵敏检测三聚氰胺含量的酶联免疫方法。并为快速检测三聚氰胺酶联免疫检测试剂盒的开发研制奠定基础。