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目的：(1)探讨IFRG15在小鼠体外培养的植入前胚胎中的表达情况，为研究IFRG15在体外受精胚和体细胞克隆胚中的表达情况奠定基础，为揭示研究IFRG15在小鼠植入前胚胎中的作用提供理论依据和参考。(2)获得IFRG15所编码的重组蛋白质，为进一步研究该蛋白质的生物学功能奠定基础。
方法：(1)对昆明系小鼠体内受精卵进行体外培养获取植入前各期胚胎；提取各期胚胎的总RNA；利用一步法RT-PCR获取各期胚胎中IFRG15的cDNA；对得到的cDNA进行琼脂糖凝胶电泳检测，并利用图像处理软件和数据统计分析软件对小鼠各期胚胎中IFRG15的表达情况进行半定量分析。(2)提取昆明小鼠基因组DNA；以基因组DNA为模板PCR扩增小鼠IFRG15；用EcoRI和XhoI双酶切凝胶回收的扩增产物和pGEM-T克隆载体后连接，转化入大肠杆菌DH5a感受态细胞，提取质粒DNA并进行双酶切和测序鉴定；将测序正确的pGEM-T-Mifrg15重组质粒双酶切获得IFRG15片段，与双酶切的原核表达pET-41c连接，将pET-41c-Mifrg15重组质粒转化入大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞，提取重组质粒DNA进行双酶切鉴定；对确认连接正确的pET-41c-Mifrg15重组质粒用IPTG诱导融合蛋白的表达，对表达产物进行SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)检测；利用两种亲和层析法对表达的重组蛋白进行分离纯化。
结果：(1)通过体外培养获得了发育至各期的胚胎；提取各期胚胎总RNA后，一步法RT-PCR反应获得各期胚胎中IFRG15的cDNA经1.2％琼脂糖凝胶电泳显示，IFRG15在小鼠植入前各期胚胎中均有表达，且在受精卵，2-细胞期，4-细胞期胚胎中表达差异不显著，在8-细胞期，桑葚胚及囊胚期胚胎中的表达与其他各期呈显著差异（P＜0.01），在囊胚期胚胎中表达量最高。(2)以小鼠基因组DNA为模板PCR扩增IFRG15产物进行1.2％琼脂糖凝胶电泳获得清晰、明亮条带，大小约为411bp；pGEM-T-Mifrg15重组质粒双酶切产物经1.2％琼脂糖凝胶电泳获得两条清晰的电泳条带，一条为411bp左右的目的基因条带，一条为pGEM-T载体片段，测序结果与NCBI中提供的小鼠IFRG15编码区序列一致；pET-41c-Mifrg15重组质粒双酶切产物经1.2％琼脂糖凝胶电泳获得两条清晰的电泳条带，一条为411bp左右的目的基因条带，一条为pET-41c载体片段；SDS-PAGE结果显示，经IPTG诱导含重组表达质粒的大肠杆菌在相对分子约47kD位置上显示出一条特异表达的蛋白条带，与重组蛋白理论值大小相符；SDS-PAGE结果显示两种亲和层析法均获得的纯化蛋白条带单一、清晰，大小为约为47kD，与重组蛋白理论值大小相符。
综上所述，小鼠植入前胚胎中IFRG15表达量随发育时程的改变而变化，IFRG15对胚胎发育有重要意义。IFRG15可以在原核细胞中高效表达，在变性条件下，MIFRG15蛋白可以被有效纯化。