目的：　　1、观察降钙素基因相关肽（Calcitonin Gene Related Peptide，CGRP）通过预先给药，对乳鼠心肌细胞缺氧/复氧（Anoxia-reoxygenation，A/R）损伤的影响。　　2、研究诱导mitoKATP通道的开放对乳鼠心肌细胞缺氧/复氧损伤的影响。　　3、在缺氧/复氧前对培养的乳鼠心肌细胞进行不同的药物干预，通过观察Caspase-3、Caspase-9酶活性的变化，进一步探索sarcKATP/mitoKATP通道在CGRP对心肌细胞保护作用过程中的影响。　　方法：　　1、在体外原代培养和鉴定乳鼠心肌细胞。选用1~3 d龄健康的SD大鼠,雄性,建立模型乳鼠心肌细胞的体外原代培养。心肌细胞的鉴别方法采用免疫细胞组织化学法，即SABC法。　　2、心肌细胞的缺氧/复氧模型的制作。采用培养72 h生长接近融合状态并且搏动状态良好的心肌细胞，更换缺氧液，置于持续通入高纯氮气的密闭缺氧盒中培养3 h，模拟缺氧；更换复氧液后，在CO2培养箱中培养2 h，模拟复氧。　　3、CGRP对乳鼠心肌细胞的缺氧/复氧损伤的影响。将心肌细胞培养了72 h过后，选取搏动良好的24孔心肌细胞，采用随机数字表法分成了4组(n=6):（1）对照组：不进行A/ R处理,正常情况下持续培养；（2）缺氧/复氧（A/R）组:进行A/R处理；（3）CGRP+A/R组：缺氧前30 min给予CGRP (10-8mol/L),之后开始进行A/R处理；（4）CGRP8-37+CGRP+A/R组：缺氧前30 min给予CGRP8-37（10-6mol/L）,10 min后给予CGRP ，之后同A/R组。提炼蛋白之后，每组分别采用分光光度法检测各组心肌细胞A/R损伤后Caspase-3、Caspase-9酶活性。　　4、mitoKATP通道的激活对SD 大鼠心肌细胞缺氧/复氧损伤的影响。将心肌细胞培养72 h后，筛选搏动良好的6孔细胞进行实验: DZ+A/R组：缺氧前20 min给予DZ（10-4mol/L）,之后同A/R组。提炼蛋白之后，每组分别采用分光光度法检测各组心肌细胞A/R损伤后Caspase-3、Caspase-9酶活性。　　5、诱导sarcKATP/mitoKATP通道的开放在CGRP起到保护心肌细胞作用的过程中的作用。将心肌细胞培养了72 h过后，选取搏动良好的18孔心肌细胞，采用随机数字表法分成 3 组(n=6):（ 1 ） 5-HD+CGRP+A/R 组：缺氧前 30 min 给予 5-HD （5×10-4mol/L），10 min后给予CGRP ，之后同A/R组；（2）Glibenclamide+CGRP+A/R组：缺氧前30 min给予Glibenclamide（10-5mol/L）,10 min后给予CGRP ，之后同A/R组；（3）HMR-1098+CGRP+A/R组：缺氧前30 min给予HMR-1098（10-5mol/L）,10 min后给予CGRP ，之后同A/R组。提炼蛋白之后，每组分别采用分光光度法检测各组心肌细胞A/R损伤后Caspase-3、Caspase-9酶活性。　　6、PKA/PKC通路在CGRP激活mitoKATP通道的过程中的作用。将心肌细胞培养了72 h过后，选取搏动良好的12孔心肌细胞，采用随机数字表法分成2组(n=6):（1）H-89+CGRP+A/R组：缺氧前30 min给予H-89（3×10-6mol/L）,10 min后给予CGRP ，之后同 A/R 组；（2）chelerythine+CGRP+ A/R 组：缺氧前 30 min 给予chelerythine（2×10-6mol/L）,10 min后给予CGRP ，之后同A/R组。提炼蛋白之后，每组分别采用分光光度法检测各组心肌细胞A/R损伤后Caspase-3、Caspase-9酶活性。　　结果：　　1、成功建立了乳鼠心肌细胞的体外培养模型。经检测，90%以上为心肌细胞。　　2、成功建立了乳鼠心肌细胞的缺氧/复氧模型，A/R损伤引起心肌细胞的凋亡蛋白酶Caspase-3、Caspase-9的酶活性可见特别增高。　　3、正常的乳鼠心肌细胞中存在有大量的CGRP受体，且它分布在细胞核和细胞质中。　　4、与对照组相比，A/R 组心肌细胞中 Caspase-3、Caspase-9 的酶活性均显著上升（P<0.05）。与A/R组相比，CGRP+A/R组心肌细胞中Caspase-3、Caspase-9的酶活性均明显降低（P<0.05），而使用 CGRP 受体拮抗剂 CGRP8-37 该作用可被逆转（P<0.05）。　　5、与A/R组相比，DZ+A/R组，心肌细胞中的Caspase-3、Caspase-9的酶活性均明显降低（P<0.05）。　　6、与CGRP+A/R组相比，Glibenclamide+CGRP+A/R组心肌细胞中Caspase-3、Caspase-9的酶活性均明显升高（P<0.05）；但HMR-1098+CGRP+A/R组心肌细胞中Caspase-3、Caspase-9的酶活性并未明显升高, 与CGRP+A/R组相比，无统计学意义。此外，5-HD+CGRP+A/R组与CGRP+A/R组相比，心肌细胞中Caspase-3、Caspase-9的酶活性则明显升高（P<0.05）。　　7、与CGRP+A/R组相比，H-89+CGRP+A/R组心肌细胞中Caspase-3、Caspase-9的酶活性均有升高的趋势，但无统计学意义。chelerythine+CGRP+A/R组心肌细胞中Caspase-3、Caspase-9的酶活性出现明显升高（P<0.05）。　　结论：　　1、CGRP对经过缺氧/复氧损伤心肌细胞起到保护的作用。　　2、引发 mitoKATP通道开放可降低乳鼠心肌细胞缺氧/复氧损伤，达到保护心肌细胞的目的。　　3、CGRP 通过 PKC-mitoKATP 通路抑制缺氧/复氧引发的乳鼠心肌细胞中Caspase-3和Caspase-9酶活性升高，从而达到保护心肌细胞的目的。