酪蛋白糖巨肽的分离纯化及其对小鼠免疫功能影响的研究

来源 :天津科技大学 | 被引量 : 1次 | 上传用户:lengzhichao12321
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酪蛋白糖巨肽(Casein Glycomacropeptide, CGMP)是乳清蛋白的重要组成部分,具有独特的氨基酸组成,它几乎不含有芳香族氨基酸,且富含支链氨基酸。其主要生物活性有促双歧杆菌增殖,抑制胃液的分泌,防止毒素、细菌和病毒的侵害以及调节免疫系统等。因此,CGMP可作为功能性食品的重要原料。本课题以实验室自制干酪乳清为原料,通过盐析条件的选择,以及对超滤温度、压力和时间等条件的控制,找到最佳的CGMP的粗提工艺参数。实验表明,采用硫酸铵终浓度为20%进行盐析时,上清液中唾液酸含量最高,达到993.16mg/L:超滤最佳工艺条件为压力:0.2MPa,温度45℃,35min作为一个超滤周期;采用D201GF树脂对超滤后蛋白混合物进行纯化,离子交换层析选择含0.4mol/L NaCl的20mmol/L Tris-HCl缓冲液进行洗脱,经冻干后获得成品。用紫外测定法进行纯度检测,纯度达到83.97%,纯化效果明显;SDS-PAGE电泳实验结果表明,CGMP的分子量约为16000Da。用CGMP对BALB/c小鼠进行灌胃后,测定免疫指标。免疫器官指数试验结果表明CGMP能提高小鼠的脾脏指数,激活脾细胞的活性功能;MTT比色法考察CGMP对BALB/c小鼠免疫系统的影响,分别测量ConA和LPS刺激下小鼠脾细胞增殖情况,发现CGMP能够不同程度的提高小鼠B淋巴细胞刺激指数,CGMP各剂量组均显著优于日食组和乳清组。巨噬细胞吞噬鸡红细胞试验表明CGMP能提高巨噬细胞吞噬鸡红细胞的能力,且剂量—效应呈正相关关系。综上所述,实验获得了一套从乳清中分离纯化CGMP的方法,经分析证明由此法制得的产品纯度较高。通过研究CGMP对BALB/c小鼠免疫功能的影响,证明CGMP能够调节机体免疫系统,具有提高免疫系统功能的作用,是一种很有开发潜质的免疫活性物质。
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