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目的：动脉粥样硬化是心脑血管病的主要病因,严重危害了人类的健康。而内皮细胞氧化损伤是动脉粥样硬化的发生、发展的病理基础。氧化低密度脂蛋白(OX-LDL)对血管内皮细胞的氧化损伤近年来被国内外许多学者所关注。α-硫辛酸(Lipoic acid,LA)具有“万能氧化剂”之称。本实验通过体外培养人脐静脉内皮细胞的方法探讨硫辛酸对由OX-LDL所致内皮细胞氧化损伤的保护作用及其可能的作用机制,为硫辛酸等具有抗氧化能力的药物用于动脉粥样硬化的防治提供实验及理论依据。方法：1.体外人脐静脉内皮细胞(HUVEC)损伤模型的建立：采用两步非连续性密度梯度超速离心法分离低密度脂蛋白(LDL),Cu2+与LDL于37℃共孵育24h制备OX-LDL,MDA法检测LDL的氧化程度。将不同浓度的OX-LDL(100,200,300μg/mL)与内皮细胞共孵育24h、48h,MTT法检测内皮细胞存活率,取细胞上清测其MDA含量,并观察各组细胞形态变化。2.LA对体外HUVEC氧化损伤保护作用的研究：(1)LA对正常HUVEC的直接作用实验：实验分control组、LA不同浓度组(0.1,0.2,0.5mmol/L)。将不同浓度LA与90%融合的HUVEC细胞共同孵育24h,MTT法检测内皮细胞活力。(2)LA对体外HUVEC氧化损伤保护作用的研究：实验分control组、LDL组、OX-LDL组、LA低中高浓度(0.1,0.2,0.5mmol/L)与OX-LDL共同作用组。待96、6孔板中90%的细胞融合后,将上述LA的各浓度与细胞预孵育30min后,加入Ox-LDL 180μg/mL,继续培养24h,MTT法检测内皮细胞存活率；取细胞上清测MDA及LDH的含量；收集细胞,用western blot,RT-PCR方法检测LOX-1,Bcl-2,CRP蛋白表达及LOX-1,CRP mRNA的表达水平。结果：1.不同浓度的OX-LDL与HUVEC共同孵育24h,48h后,HUVEC的活性呈浓度时间依赖性降低,各浓度组OD值与control组相比均显著下降(P<0.01)。MTT法测得24h、48h后OX-LDL(100μg/mL、200μg/mL、300μg/mL)处理组细胞存活率分别为80.4±5.23%、55.3±3.28%、28.8±2.34%和55.7±4.89%、21.8±3.01%、14.4±1.93%。细胞上清MDA测定200μg/mL OX-LDL组(6.9±0.67nmol/mL)与300μg/mLOX-LDL组(7.14±0.74nmol/mL)明显高于control组(3.4±0.99nmol/mL)(P<0.01)。与24h后细胞存活率相比,48h后各OX-LDL组细胞存活率明显降低(P<0.01)。显微镜下观察100μg/mL OX-LDL组细胞变形,但细胞轮廓清楚。200μg/mL OX-LDL组与300μg/mL OX-LDL组细胞变圆,不贴壁,出现明显的脱落现象。2.(1)LA对正常HUVEC的直接作用结果显示：与control组比较,LA浓度在0.1-0.5mmol/L时对细胞存活率无明显影响(P>0.05)。(2)LA对体外HUVEC氧化损伤保护作用的研究：与control组比较,LA可剂量依赖性的显著提高内皮细胞存活率(P<0.0 1),降低细胞上清MDA及LDH的含量(P<0.01)。OX-LDL作用HUVEC 24h后,HUVEC中的LOX-1 mRNA和蛋白表达水平明显升高,而Bcl-2蛋白表达水平降低(P<0.01),未能检测到CRP的表达。LA可剂量依赖性的抑制LOX-1蛋白及mRNA的表达及促进Bcl-2蛋白的表达。结论：1.100-300μg/mL OX-LDL对HUVEC有直接的细胞毒作用,并呈一定的浓度和时间依赖性。2.LA可剂量依赖性的提高OX-LDL氧化损伤的HUVEC细胞存活率,降低MDA.LDH的含量。3.LA可以上调人脐静脉内皮细胞Bcl-2蛋白的表达,下调LOX-1蛋白和mRNA的表达,推测LA可能通过其抗凋亡、抗氧化作用保护HUVEC免受OX-LDL损伤,从而预防AS的发生。4.OX-LDL氧化损伤的人脐静脉内皮细胞检测不到CRP蛋白及mRNA的表达。