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怀山药是河南的道地药材之一,也是中国传统的药食同源植物之一,在国内外享有盛誉,目前国内外学者对其研究多偏向于怀山药植株本身或怀山药的种植环境,而对怀山药内部微环境中的微生物研究甚少,为发掘怀山药中的内生真菌资源,本试验以怀山药植物为研究对象,首先首先对怀山药进行GSS高通量测序,发现怀山药内生真菌的种类丰富,其次对怀山药中的内生真菌进行分离、鉴定,然后对菌株进行是否产3-吲哚乙酸(IAA)的筛选,并对IAA阳性反应最明显的菌株,进行四种液体培养基的培养并测定了不同培养液中的IAA含量,然后又对筛选的一株真菌进行了次生代谢产物的研究。采用组织切割法和研磨法,在怀山药中共得到40株怀山药内生真菌,对其进行5.8SrDNA-ITS区的基因鉴定,结果表明,分离得到的内生真菌共有10个属,分别为链格孢属Alternaria sp.、镰刀菌属Fusarium sp.、黄丝曲霉属Talaromyces sp.、曲霉属Aspergillus sp.、耙齿菌属Irpex sp.,球腔菌属Mycosphaerella sp.、壳二孢属Ascochyta sp.、小不整球壳菌属Plectosphaerella sp.、小穴壳菌属Dothiorella sp.和裂褶菌属Schizophyllum commune。采用沙尔科夫斯基显色法筛选内生真菌是否具有分泌IAA的能力,发现LY-6、LY-8和LY-22内生真菌具有分泌IAA的能力,并且LY-22的颜色反应最为明显,鉴定结果表明LY-6和LY-8为链格孢菌,而LY-22为镰刀菌(Fusarium acuminatum),进而以PDB、SDB、MB、SNB 4种培养基中培养Fusarium acuminatum(LY-22),并测定其发酵液中的IAA含量,结果表明Fusarium acuminatum(LY-22)在PDB培养液中IAA的分泌量最多,最大分泌量约为1.8mg/L。运用HPLC方法,发现内生真菌LY-16的菌液乙酸乙酯萃取物和菌丝甲醇提取物的成分较为丰富,故对此菌株进行了次级代谢产物的研究,通过基因鉴定,确定此菌株为产紫黄丝曲霉菌(Talaromyces purpureogenus),并运用硅胶柱、SephadexLH-20凝胶柱、C8反向硅胶柱、C18反向硅胶柱等各种规格的色谱柱对Talaromyces purpureogenus的菌丝和菌液的提取物进行色谱分离和纯化,共获得10个化合物,以核磁波普技术对化合物进行鉴定,目前已确定结构的有6个,分别为:1,3-丁二酸(1)、麦角甾醇(2)、过氧麦角甾醇(3)、2-((R)-1-hydroxy-2-methylpropyl)-6-((S)-1-hydroxy-2-methylpropyl)pyrrolo[2,3-f]indole-4,8(1H,5H)-dione(4)、(3S,6S,12S)-6-isobutyl-3-methyl-2,3,6,7,12,12a-hexahydropyrazino[1’,2’:1,6]py rido[3,4-b]indole-1,4-dione(7)、蔗糖(10),均为首次从产紫黄丝曲霉(Talaromyces pur pureogenus)中获得,另有6个化合物目前还未确定其具体结构,其核磁波谱谱数据已在文章中列出。