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[目的] 1、研究缝隙连接蛋白26(Connexin26，GJB2)畸变引起的耳聋发病机制。 2、探讨细胞凋亡对Connexin26(Cx26)畸变导致的先天性耳聋的影响。 3、对探讨Cx26相关性耳聋的发病机制提供研究手段，并为治疗遗传性耳聋提供指导。 [方法] 1、Cx26基因敲除鼠的获得 Cx26基因敲除鼠来自于Cx26loxP/loxP鼠(Cohen-Salmon et al.，2002)与Pax2-Cre鼠(Ohyama and Groves，2004)的杂交。 2、转基因鼠的基因型检测 选取鼠尾末端1 cm组织提取DNA，使用以下的引物通过PCR扩增检测Cx26的flox等位基因组DNA: Cx26F:5-CTT TCC AAT GCT GGTGGAGTG-3和Cx26R:5-ACA GAA ATG TGT TGG TGA TGG-3。Cx26loxP/loxP和野生型鼠产生的条带分别为400bp和300bp。Pax2-Cre转基因型检测采用以下引物:CreF: CreF:5-GCC TGC ATT ACC GGT CGATGC AAC GA-3和CreR:5-GTG GCA GAT GGC GCG GCAACACCA TT-3。预期带大小为700bp。 3、检测脑干诱发电位和耳蜗微音器电位 老鼠腹腔内注射麻醉后，在双层隔音室中记录脑干诱发电位(ABR)和耳蜗微音器电位(CM)。 4、耳蜗组织的包埋与切片 耳蜗用OCT(Cat.4583，Sakura Finetek USA Inc.CA)包埋后用冰冻切片机在-23～-30℃中切成10μm厚的切片。对于石蜡切片，脱钙后用酒精梯度脱水，石蜡包埋，切片厚度在5μm，并使用传统步骤做甲苯胺蓝染色。 5、免疫荧光染色和共聚焦显微镜成像 将耳蜗切片或者分离的耳蜗感觉上皮细胞用免疫荧光染色后在激光共聚焦显微镜下观察。 6、统计学分析与统计方法 数据用SigmaPlot绘图软件绘制，用SPSSv10.0统计软件进行统计学分析(SPSS Inc.Chicago，IL)，以P＜0.05为具有显著性差异。 [结果] 1.Cx26基因敲除鼠表现为先天性耳聋。 2.听觉脑干诱发电位显示出生后有全频段的听力损害。 3.在出生后的发育过程中，Cx26基因敲除鼠没有明显的耳蜗毛细胞和神经元的变性和缺损。 4.在成年Cx26基因敲除鼠中，毛细胞和神经元的变性和缺损只在耳蜗的中、高频段出现，即耳蜗的中、底部。 5.Cx26基因敲除鼠耳蜗发育障碍，耳蜗隧道没有打开。 6.耳蜗的功能性检测发现Cx26基因敲除鼠的毛细胞仍保留有功能。耳蜗微音器电位能被检测到，但是有所降低。 [结论] 1、耳蜗细胞包括神经元细胞的变性和缺损不是造成Cx26基因敲除鼠先天性耳聋的原发性原因，而是继发性改变。 2、Cx26基因缺损所造成的耳蜗发育障碍可能是造成先天性耳聋的原因之一。