【摘 要】
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采集连云港海域的贝类、海水、深海鱼类、海底沉积物等样品,筛选产碱性蛋白酶的菌株。从分离到的217株细菌中,获得23株碱性蛋白酶酶活高的菌株,对其中两株海洋细菌CHS和SY菌
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采集连云港海域的贝类、海水、深海鱼类、海底沉积物等样品,筛选产碱性蛋白酶的菌株。从分离到的217株细菌中,获得23株碱性蛋白酶酶活高的菌株,对其中两株海洋细菌CHS和SY菌株进行生理生化和16SrDNA序列分析,初步鉴定为交替假单胞菌。以CHS和SY两株菌为出发菌株,研究它们发酵产碱性蛋白酶的条件,并分离提纯了CHS菌株产生的碱性蛋白酶,初步研究了其酶学性质。 CHS和SY菌株最适产酶发酵条件为:15℃,24h,种龄16h,2.5%接种量,摇床转速180r/min;CHS菌株起始pH为9.0,SY菌株为pH8.0。葡萄糖,蛋白胨是两菌株发酵产酶较好的碳、氮源。 CHS菌株发酵液经离心、硫酸铵盐析、透析、离子交换层析和分子筛层析后,酶的比活由59.4U/mg提高到860.8U/mg,提高了14.5倍,回收率为3.24%。在SDS-PAGE上显示一条带,达电泳纯,由SDS-PAGE初测分子量为56.9kDa。 对CHS菌株碱性蛋白酶的性质研究表明,酶最适作用温度为40℃,最适作用pH为10.0,在40℃保温30min酶活下降约50%,热稳定性较差,在pH8.0-11.0有较好的稳定性。PMSF能强烈抑制酶的活性,而EDTA和IAA对该酶的抑制作用不太明显。Ca2+、Cu2+对酶有一定激活作用,Ag+对酶有抑制作用;酶对乙醇和尿素有较强的抗性,对吐温有一定抗性,SDS对其有抑制作用。
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