管状空心二氧化硅固定化葡萄糖氧化酶及胺肟螯合树脂固定化青霉素酰化酶研究

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以低成本、规模化制备和应用为目标,提出了一种以硅酸钠为硅源,通过溶胶—凝胶法形成CaCO3/SiO2核壳结构;随后通过煅烧和酸溶获得形貌和壁厚均可控的微孔空心SiO2纳米粒子的制备新工艺。提出了有机—无机双模板技术以合成介孔空心SiO2的新方法。成功地以TEOS为有机硅源,通过引入CTAB作为介孔孔道导向剂,合成出了具有一定有序介孔结构且形貌较佳的SiO2纳米空心管。在实施酶的固定化过程中,考察了不同的液相、pH值、固定化温度、固定化时间及给酶量等条件对固定化葡萄糖氧化酶活性的影响。所得的最佳固定化条件为:水相为固定化时的液相;给酶量即载体的质量和游离酶的体积比为0.6g/ml;固定化时间为4-6h;固定化温度为28℃;固定化pH值为6.5。为了检验固定化葡萄糖氧化酶的性能,考察了游离酶与固定化酶的催化反应最适pH值,最适温度,固定化酶的连续操作稳定性,贮藏稳定性,热稳定性以及几种载体的操作稳定性的比较和米氏常数。实验结果表明:游离酶和固定化酶的酶催化反应最适pH值分别为5.6和5.2,且固定化酶的适用pH值范围变宽。游离酶的酶催化反应最适温度为28℃,在较低与较高温度时其活性都低;固定化酶的最适温度为32℃,且在较大温度范围内(24℃~36℃)都保持了较高的活性。固定化酶的连续操作稳定性、贮藏稳定性及热稳定性都比较稳定。固定化酶和游离酶的米氏常数分别为28.7×10-2mol/L与15.6×10-2mol/L,固定化酶由于将游离的葡萄糖氧化酶包埋在管状结构的内部,影响了底物向酶分子的扩散,使得固定化酶的米氏常数高于游离酶。对胺肟螯合树脂的合成进行了简要介绍,并将其用于青霉素酰化酶的固定化。考察了游离酶与固定化酶的催化反应最适pH值,最适温度,固定化酶的连续操作稳定性,贮藏稳定性。实验结果表明:游离酶和固定化酶的酶催化反应最适pH值分别为9和8.5,且固定化酶的适用pH值范围变宽。游离酶的酶催化反应最适温度为45℃,在较低与较高温度时其活性都低;固定化酶的最适温度为50℃,且在较大温度范围内(40℃~55℃)都保持了较高的活性。
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