目的:女性盆底功能障碍性疾病(pelvic floor dysfunction, PFD)是一种常见的妇科疾病,主要发生于中老年妇女,近年来,随着社会趋于老龄化,其发病率也不断增高。PFD给广大妇女身体及心理造成了很大的危害,对于广大医务工作者而言,只有明确其发病机制,才能更好的在临床中进行有效的诊治。本研究通过检测PFD患者子宫主韧带组织中胶原蛋白Ⅲ型(CollagenIII)及分解胶原蛋白Ⅲ的基质金属蛋白酶-3(MMP-3)的表达水平,进而分析胶原蛋白Ⅲ及MMP-3的表达水平与PFD发病的关系。方法: 1研究对象:标本取自2009年3月至2010年12月河北省人民医院妇科收治的PFD患者26例作为实验组,诊断标准参照盆腔器官脱垂定量分期法(POP-Q),入选患者均为Ⅲ、Ⅳ期POP。其中16例为绝经前女性,10例为绝经后女性。选取同期因妇科良性病变行子宫切除术的非PFD女性24例为对照组,其中14例为绝经前女性,10例为绝经后女性。所有研究对象均无松皮病、肺气肿、烟雾病等弹性纤维异常疾病,无生殖道、泌尿系感染,绝经前患者子宫内膜均处于增殖期,近3个月内未服用激素类药物,术后病理检查证实为非子宫内膜异位症等雌激素相关疾病。2实验方法:于术中取宫颈旁0.5cm范围内的子宫主韧带组织(0.5×0.5×0.5cm3),并经甲醛固定,常规石蜡包埋,部分组织切片行HE染色,以明确组织学结构。本研究所有对象术前均签署知情同意书。采用免疫组化方法,检测绝经前PFD组(16例)、绝经前对照组(14例)、绝经后PFD组(10例)和绝经后对照组(10例)共4组50例患者子宫主韧带组织中MMP-3及CollagenⅢ表达水平。3实验试剂:主要试剂有兔抗人Ⅲ型胶原单克隆抗体、兔抗人MMP- 3多克隆抗体、S-P试剂盒、液体DAB酶底物显色试剂盒、磷酸氢二钠、磷酸二氢钠、氯化钠,过氧化氢等。4免疫组化图像分析:①选择光镜下400倍视野,每张免疫组化片上随机选择5个视野,每个视野拍摄5幅照片;②采用Motic Med 6.0数码医学图像分析系统分析各组子宫主韧带组织中MMP-3、CollagenⅢ免疫组织化学染色的阳性区平均灰度值。然后计算平均值。5运用SPSS(13.0)软件对数据进行统计学分析。结果:1 PFD发病的主要影响因素影响PFD发生的主要因素有患者的年龄、分娩次数、体重指数,绝经年龄有关系,将绝经前与绝经后PFD组与对照组上述各主要因素进行比较,经两均数比较t-检验,各组在各主要因素上均无显著性差异(P>0.05),说明两组间具有较好的可比性。2光镜观察结果实验组女性子宫主韧带组织中胶原密度降低,排列稀疏、细碎,束间含有血管、平滑肌等结构,细胞排列松散,细胞核存在固缩、碎裂等现象;对照组中可见胶原纤维为淡红色,染色均匀,且含量丰富,呈束状、编织状排列,细胞排列规则,致密,细胞核蓝染,位于胶原纤维周边,无固缩、碎裂等现象。3免疫组化结果3.1 MMP-3表达结果的比较MMP-3主要定位于胞浆中,阳性反应物为棕黄色,对每张切片在高倍镜下观察,利用计算机系统测定其平均灰度值。绝经前PFD组子宫主韧带组织中MMP-3表达的平均灰度值为89.76±7.86,绝经前对照组平均灰度值为73.68±7.02,经统计学配对t检验分析:PFD组与对照组相比,P=0.01(P<0.05),有显著性差异。绝经后PFD组子宫主韧带组织中MMP-3的平均灰度值为106.23±4.28,绝经后对照组平均灰度值为91.29±7.16,经统计学配对t检验:PFD组与对照组相比,P=0.001(P<0.05),有显著性差异。3.2 Collagen-Ⅲ表达结果的比较Collagen-Ⅲ主要定位于胞核或胞浆中,阳性反应物为棕黄色,对每张切片在高倍镜下观察,利用计算机系统测定其平均灰度值。绝经前PFD组子宫主韧带组织中Collagen-Ⅲ的平均灰度值为102.06±7.76,绝经前对照组平均灰度值为89.59±9.89,经统计学配对t检验:PFD组与对照组相比,P=0.003, (P<0.05)有显著性差异。绝经后PFD组子宫主韧带组织中Collagen-Ⅲ的平均灰度值为90.24±6.67,绝经后对照组平均灰度值为79.86±7.98,经统计学配对t检验:PFD组与对照组相比,P=0.01(P<0.05),有显著性差异。3.3绝经前PFD组CollagenⅢ与MMP-3表达水平的相关性分析采用Pearson相关分析法,绝经前PFD组二者的相关系数r=-0.719 ,P=0.002(P<0.05),结果提示二者表达水平成显著负相关。3.4绝经后PFD组CollagenⅢ与MMP-3表达水平的相关性分析采用Pearson相关分析法,绝经前PFD组二者的相关系数r=-0.994,P=0.000(P<0.05),结果提示二者表达水平成显著负相关。结论:1不论绝经前还是绝经后,PFD组患者子宫主韧带组织中CollagenⅢ表达量均较对照组减少,导致子宫主韧带组织中以胶原为主的结缔组织减少,由此引发对子宫的支持力减弱,无法维持子宫解剖位置的正常水平,从而引起PFD的发生。2在本实验中,绝经前后PFD组患者子宫主韧带组织中MMP-3表达量均较对照组升高,可能导致子宫主韧带结缔组织的胶原分解增加,从而造成盆底支持结构受损,它们的变化可能是导致PFD发生和发展的因素。3 CollagenⅢ与MMP-3在PFD组子宫主韧带中的表达呈显著负相关,说明MMPs家族通过分解胶原蛋白,造成了盆底支持结构的减少,进而引发盆底韧带及筋膜的松弛,导致PFD的发生。