论文部分内容阅读
目的:探讨罗哌卡因通过Caspase-3信号通路在体外对人宫颈癌HeLa细胞株的增殖抑制、诱导细胞凋亡的作用及其部分机制,为进一步研究罗哌卡因应用于临床上宫颈癌患者手术围术期的可行性提供实验依据。方法:取对数生长期的人宫颈癌HeLa细胞株于培养皿中培养,随机分为对照组(C组)和实验组(罗哌卡因,R组),用MTT法进行药物浓度筛选实验后,将R组分为低浓度组(500μM,LD),中浓度组(I000μμM,MD),高浓度组(1500μM,HD)。应用MTT法测定不同浓度的罗哌卡因对宫颈癌HeLa细胞株的增殖能力和细胞活性的影响;经过DAPI染色处理后,在荧光显微镜下观察宫颈癌HeLa细胞株的形态和结构的改变;应用流式细胞仪检测不同浓度罗哌卡因对于宫颈癌HeLa细胞株早期凋亡和晚期凋亡的影响;应用免疫印迹法检测 Bcl-2、Bax、细胞色素 C(Cytochrome C)、Caspase-3、Caspase-8、Cleaved-caspase 8的蛋白表达水平。结果:1.MTT法的检测结果显示:宫颈癌HeLa细胞株经罗哌卡因处理24h,药物浓度分别为10μM、25μM、50μM、100μM、250μM时细胞生长抑制无明显差异(P>0.05),但LD组、MD组、HD组的宫颈癌HeLa细胞株的活性明显低于C组,C组细胞抑制率为0.67%,LD组细胞抑制率为26.32%,MD组细胞抑制率为38.99%,HD组细胞抑制率为51.84%,与C组相比,随着药物浓度的增高,抑制率显著增加(P<0.05)。LD组、MD组、HD组培养48h时无明显差(P>0.05)。2.罗哌卡因处理的HeLa细胞株经DAPI染色后,在倒置显微镜下观察可见,C组细胞核完整,胞浆饱满,R组出现细胞胞浆凝缩,体积变小,细胞核破碎,染色质凝聚等细胞凋亡的形态学特征。3.流式细胞仪检测显示,C组凋亡细胞占总细胞数的1.9%,LD组凋亡细胞占7.8%,MD组凋亡细胞占9.7%,HD组凋亡细胞占12.3%,罗哌卡因以浓度依赖性的方式提高宫颈癌HeLa细胞凋亡率(P<0.05)。罗哌卡因处理后宫颈癌细胞的分布由活细胞向凋亡早期和晚期转变,C组晚期凋亡细胞占总细胞数的1.6%,LD组晚期凋亡细胞占6.5%,MD组晚期凋亡细胞占8.8%,HD组晚期凋亡细胞占11.4%,具有浓度依赖性(P<0.05)。4.蛋白质免疫印迹法结果显示,与C组相比,罗哌卡因以浓度依赖性的方式提高Caspase-3的表达水平,上调促凋亡蛋白Bax的表达水平,降低抗凋亡蛋白Bcl-2的表达水平,诱导Cytochrome C的释放,上调 Caspase-8 和 Cleaved-caspase 8的蛋白表达水平(P<0.05)。结论:1.罗哌卡因显著抑制人宫颈癌HeLa细胞株的增殖和细胞活力。2.罗哌卡因在体外诱导人宫颈癌HeLa细胞株凋亡,其作用机制可能与调控Caspase-3信号通路有关。