【摘 要】
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目的 研究miR-34a-5p在LPS诱导的血管内皮细胞损伤中的调节作用和其潜在的调控机制。方法 用LPS刺激人脐静脉内皮细胞（HUVECs）建立内皮损伤模型,再利用miRNA芯片筛选出LPS处理的HUVECs细胞中的差异miRNAs。将miR-34a-5p mimic或miR-34a-5p inhibitor 或 NC-miRNAs,以及 pcDNA-FOXM 1 或空载 pcDNA分别用Lip
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目的 研究miR-34a-5p在LPS诱导的血管内皮细胞损伤中的调节作用和其潜在的调控机制。方法 用LPS刺激人脐静脉内皮细胞（HUVECs）建立内皮损伤模型,再利用miRNA芯片筛选出LPS处理的HUVECs细胞中的差异miRNAs。将miR-34a-5p mimic或miR-34a-5p inhibitor 或 NC-miRNAs,以及 pcDNA-FOXM 1 或空载 pcDNA分别用Lipofectamine 3000转染至HUVECs中。采用MTT法检测细胞活力,流式细胞仪检测细胞凋亡比例,ELISA检测细胞炎性因子IL-6、IL-1β以及TNF-α。分别用qRT-PCR和Western blot检测各组内皮细胞中miR-34a-5p和FOXM1 mRNA及蛋白表达量,细胞成管实验检测细胞成管率。此外,在线数据库分析结合双荧光素酶报告基因检测确定miR-34a-5p的直接靶基因。结果 1.诱导内皮细胞损伤的最佳LPS浓度为10 μg/ml,最适作用时间为24 h。2.miRNA芯片筛选出的差异miRNA为miR-34a-5p,且其在LPS处理的HUVECs细胞中水平显著升高。3.LPS处理的HUVECs细胞转染miR-34a-5p inhibitor能下调miR-34a-5p水平,上调细胞活力,抑制细胞凋亡,降低炎性因子IL-6、IL-1β和TNF-α的水平,提高成管率。4.在线数据库预测miR-34a-5p的直接靶基因是FOXM1,且qRT-PCR、Western blot检测和双荧光素酶报告基因检测均表明FOXM1的表达与miR-34a-5p呈负相关。5.在经LPS处理的内皮细胞中过表达FOXM1,细胞活力升高,成管率增高,但细胞凋亡比例下降,伴随着促炎因子水平降低,NRF2/HO-1通路被激活。在HUVECs过表达FOXM1的基础上转染miR-34a-5p mimics,发现细胞活力下降,成管能力减弱,凋亡增多,炎性因子水平也升高,NRF2/HO-1通路被抑制。结论 1、LPS处理的HUVECS细胞中miR-34a-5p水平上调,而抑制miR-34a-5p可减轻LPS诱导的内皮损伤。2、FOXM1是miR-34a-5p的直接靶基因。3、miR-34a-5p通过抑制FOXM1表达调控NRF2/HO-1通路,进而参与LPS诱导的内皮细胞损伤过程,故抑制miR-34a-5p促进FOXM1表达可激活NRF2/HO-1通路从而减轻LPS诱导的内皮损伤。
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