重组SNX11蛋白PX结构域的晶体学研究

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分选连接蛋白Sorting Nexin(SNXs),是一类含有PhoXhomology(PX)结构域,且参与调节胞内膜运输和蛋白分选的蛋白大家族。PX结构域可以通过结合磷脂及其磷酸化衍生物,将蛋白定位到该磷脂富集的膜上,使蛋白发挥它的功能。人源的SNX11是根据SNX家族成员SNX1的序列在ETS库中搜索得到的。通过和家族其他成员的序列比对及二级结构预测分析,SNX11与其他成员一样具有结合磷脂的保守氨基酸残基,和经典的PX结构域二级结构特征。到目前为止,虽然大部分SNX11所属亚家族的成员的功能都已有研究,但还没有关于SNX11的功能被报道。由于通过PX结合磷脂的特性有助于分析该蛋白的功能,所以需要得到SNX11-PX的三维精细结构。   本研究旨在获得人源和鼠源SNX-PX结构域具有高衍射分辨率的晶体,并进行晶体学的初步分析。现在已成功构建了3个人源和1个鼠源的SNX11含有PX结构域的截短片段。通过转化大肠杆菌E.Coli Rosetta 2(DE3),4个片段都可在上清中已可溶形式大量表达。纯化后,用SDS-PAGE的鉴定结果显示纯度都在95%以上,且分子筛洗脱体积说明这4个片段在溶液中都是单体形式存在的。经过结晶初筛,用坐滴汽相扩散的方法在20oC获得了晶体。通过优化得到了4个蛋白具有高衍射质量的晶体。衍射数据已收集,结构已用分子置换的方法解得,模型还需修正。
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